产气荚膜梭菌NetB毒素基因重组植物乳酸杆菌的构建

发布时间：2018-07-31 15:35

【摘要】：选择产气荚膜梭菌坏死性肠炎毒素B(NetB)为抗原,构建产气荚膜梭菌NetB毒素基因重组植物乳酸杆菌,利用植物乳酸杆菌穿梭载体pSIP409构建重组质粒pSIP409-NetB,经双酶切鉴定和序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行SppIP诱导表达。Western blot证明重组蛋白表达成功,并且主要以包涵体形式存在,NetB重组蛋白相对分子质量为36 ku。重组质粒pSIP409-NetB电转化植物乳酸杆菌NC8细胞,PCR和双酶切鉴定正确后进行SppIP诱导表达。Western Blot和间接免疫荧光鉴定表明构建的重组植物乳酸杆菌具有诱导分泌NetB蛋白的能力,可作为黏膜免疫的候选抗原。
[Abstract]:The recombinant plasmids of Clostridium perfringens necrotizing enterocolitis B (NetB) were selected as antigen to construct the recombinant plant lactobacillus in the recombinant plant of Clostridium perfringens NetB toxin gene, and the recombinant plasmid pSIP409-NetB was constructed by the shuttle carrier pSIP409 of plant lactobacillus plantarum. After the identification and sequencing of double enzyme digestion and sequence determination, the BL21 (DE3) receptive cells of Escherichia coli were converted to SppIP. The expression of.Western blot showed that the recombinant protein was expressed successfully, and the recombinant protein was mainly in the form of inclusion body. The relative molecular mass of NetB recombinant protein was 36 ku. recombinant plasmid pSIP409-NetB electroporation of Lactobacillus NC8 cells. PCR and double enzyme digestion were correctly identified by SppIP induction table to.Western Blot and indirect immunofluorescence identification. The recombinant Lactobacillus plantarum has the ability to induce the secretion of NetB protein and can be used as a candidate antigen for mucosal immunity.
【作者单位】： 黑龙江省兽医科学研究所;东北农业大学动物医学学院;
【分类号】：S852.61

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2156026