胸腺五肽在植物乳杆菌中的表达及其活性检测

发布时间：2018-08-05 13:56

【摘要】：根据胸腺五肽(TP5)的基因序列,进行植物乳杆菌(Lp1)密码子偏嗜性修饰,并克隆至由超强启动子SCP驱动外源基因表达的植物乳杆菌表达载体p SCPSP,电转化表达宿主菌植物乳杆菌。通过PCR筛选出阳性重组转化子,并用胸腺五肽ELISA特异性检测试剂盒检测重组植物乳杆菌16 h、20 h、24 h、28 h培养上清中目的蛋白的表达含量。用培养第12小时的乳杆菌灌胃刚断奶的SPF级BALB/c小鼠,每日1次,连续14 d,以小鼠的胸腺指数、脾指数和血清中IL-2的含量为指标检测TP5的生物活性。ELISA结果表明,在培养第24小时目的蛋白表达含量最高,且重组植物乳杆菌能显著增加小鼠的胸腺指数和血清中IL-2的含量,对脾指数无显著影响。结果表明,TP5在植物乳杆菌中成功表达,并有良好的生物活性。
[Abstract]:According to the gene sequence of thymus pentapeptide (TP5), the codon of Lactobacillus plantarum (Lp1) was modified and cloned into Lactobacillus plantarum expression vector, which was driven by superstrong promoter SCP, and was electrotransformed into Lactobacillus plantarum. The positive recombinant transformants were screened by PCR, and the expression of target protein in the supernatant of recombinant Lactobacillus plantarum was detected by ELISA assay kit. SPF grade BALB/c mice were fed with Lactobacillus lactis for 12 hours, once a day for 14 days. The index of thymus, spleen index and the content of IL-2 in serum were used as indexes to detect the bioactivity of TP5. Elisa results showed that: 1. The expression of target protein was the highest at the 24th hour of culture, and the recombinant Lactobacillus plantarum could significantly increase the thymus index of mice and the content of IL-2 in serum, but had no significant effect on spleen index. The results showed that TP5 was successfully expressed in Lactobacillus plantarum and had good bioactivity.
【作者单位】： 华南农业大学兽医学院;
【基金】：广东省省级科技计划项目(2013B020202002)
【分类号】：S859.79

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