表达羊口疮病毒B2L基因重组腺病毒的构建及鉴定

发布时间：2018-09-01 09:14

【摘要】：为构建表达羊口疮病毒(ORFV)B2L基因的重组腺病毒,提取实验室保存的ORFV AH-F10临床分离株的病毒核酸,PCR扩增B2L基因,将其克隆至穿梭载体中,再将重组穿梭质粒pHBAd-ORFV-B2L与骨架载体质粒pHBAdBHGloxΔE1利用脂质体共转染HEK293细胞,转染后48h收获包装成功的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L,对rAdORFV-B2L进行病毒滴度测定及遗传稳定性鉴定。结果表明:构建获得的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L病毒滴度达到107.9 TCID50·μL~(-1)。Western-blot检测结果表明rAd-ORFV-B2L在体外能够表达B2L蛋白,且能够与ORFV多抗血清发生特异性反应。RT-PCR检测结果表明,连续传代的rAd-ORFV-B2L能够稳定表达外源蛋白B2L。该研究为后续腺病毒疫苗的动物保护试验奠定基础。
[Abstract]:In order to construct recombinant adenovirus expressing (ORFV) B2L gene of sheep mouth sore virus, B2L gene was amplified by PCR from clinical isolates of ORFV AH-F10 preserved in laboratory and cloned into shuttle vector. Then the recombinant shuttle plasmid pHBAd-ORFV-B2L and the skeleton vector pHBAdBHGlox 螖 E1 were co-transfected into HEK293 cells with liposome. The recombinant adenovirus rAd-ORFV-B2L, which was successfully harvested and packaged 48 hours after transfection, was used to determine the viral titer of rAdORFV-B2L and to identify its genetic stability. The results showed that the titer of recombinant adenovirus rAd-ORFV-B2L virus reached 107.9 TCID50 渭 L ~ (-1). Western-blot analysis showed that rAd-ORFV-B2L could express B2L protein in vitro, and could react specifically with ORFV multi-antiserum. RT-PCR assay showed that rAd-ORFV-B2L could express B2L protein in vitro. Continuous passage of rAd-ORFV-B2L could stably express exogenous protein B2L. This study laid the foundation for animal protection test of adenovirus vaccine.
【作者单位】： 安徽农业大学动物科技学院;宁波市疾病预防控制中心;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31602063) 安徽省自然科学基金资助项目(1508085QC60) 安徽农业大学稳定和引进人才科研项目(YJ2015-16)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2216738