水牛Smad4基因的克隆及其真核表达载体的构建

发布时间：2018-09-11 16:38

【摘要】：为了阐明Smad4基因在水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育中的分子机制,试验采用RT-PCR扩增并克隆水牛Smad4基因,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,构建Smad4基因的真核表达载体,通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞。结果表明,试验克隆得到水牛Smad4基因编码序列,编码区全长为1 662bp,编码553个氨基酸。通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比对,结果显示,水牛Smad4基因与牛的同源性为99%,与绵羊、猪、马、人的同源性分别为98%、96%、96%和95%。系统进化树分析表明,Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守性。试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4,并在水牛卵巢颗粒细胞中表达出较强的绿色荧光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功构建了Smad4基因的真核表达载体,为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定基础。
[Abstract]:In order to elucidate the molecular mechanism of Smad4 gene in the proliferation and embryonic development of buffalo ovarian granulosa cells, the buffalo Smad4 gene was amplified and cloned by RT-PCR, and its nucleotide and protein sequences were analyzed by bioinformatics. The eukaryotic expression vector of Smad4 gene was constructed and transfected into bovine ovarian granulosa cells by liposome transfection. The results showed that the encoding sequence of buffalo Smad4 gene was 1662 BP, encoding 553 amino acids. The nucleotide sequence of buffalo Smad4 gene was compared by BLAST. The results showed that the homology of buffalo Smad4 gene with cattle was 99%, and the homology with sheep, pig, horse and human was 98% and 95%, respectively. Phylogenetic tree analysis showed that Smad4 gene was highly conserved in the evolution of different species. The eukaryotic expression vector pEGFP-N1-Smad4, of buffalo Smad4 gene was successfully constructed and a strong green fluorescent protein Smad4-EGFP fusion protein was expressed in buffalo ovary granulosa cells. In this study, the buffalo Smad4 gene was cloned and the eukaryotic expression vector of Smad4 gene was successfully constructed, which laid a foundation for further study on the molecular mechanism of Smad4 gene in the course of buffalo embryo development.
【作者单位】： 中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室;
【基金】：广西科技计划项目(桂科AB16380040) 广西自然科学基金(2014GXNSFAA118116) 广西水产畜牧兽医局科技项目(桂渔牧科201633052) 广西水牛研究所基本科研业务费(水牛基1404004、160204、1705001)
【分类号】：Q78;S823.83

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本文编号：2237239