绵羊NYD-SP27基因在BHK-21细胞中的稳定表达及其特征鉴定

发布时间：2018-09-18 19:07

【摘要】：旨在构建稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞株,对NYD-SP27基因的表达特征进行分析,为进一步研究NYD-SP27基因功能奠定基础。本研究克隆绵羊NYD-SP27基因,并将其插入到真核表达载体pDsRed1-C1中,利用猪捷申病毒2A肽(P2A)将NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白连接以实现共表达,将重组质粒pDsRed-P2A-Flag-NYDSP转染至BHK-21细胞中,经G418筛选获得稳定转基因细胞株,利用RT-PCR、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot对NYD-SP27基因的表达进行鉴定。结果表明,NYD-SP27基因稳定整合至宿主细胞基因组;NYD-SP27蛋白能够在BHK-21细胞中正常表达,分子大小约为63ku;在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中,P2A成功自我剪切。本研究成功构建了绵羊NYD-SP27基因的真核表达载体,建立了稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞系。
[Abstract]:The purpose of this study was to construct a stable BHK-21 cell line expressing sheep NYD-SP27 gene, and to analyze the expression characteristics of NYD-SP27 gene, and to lay a foundation for further study on the function of NYD-SP27 gene. In this study, sheep NYD-SP27 gene was cloned and inserted into eukaryotic expression vector pDsRed1-C1. The recombinant plasmid pDsRed-P2A-Flag-NYDSP was transfected into BHK-21 cells by ligating NYD-SP27 protein with red fluorescent protein by porcine Jieshen virus 2A peptide (P2A). Stable transgenic cell lines were obtained by G418 screening. The expression of NYD-SP27 gene was identified by RT-PCR, indirect immunofluorescence (Indirect immunofluorescence assay,IFA) and Western blot. The results showed that the NYD-SP27 gene was stably integrated into the host cell genome and expressed normally in BHK-21 cells with a molecular size of about 63ku.The pP2A was successfully shredded during the translation of NYD-SP27 protein and red fluorescent protein. In this study, the eukaryotic expression vector of sheep NYD-SP27 gene was successfully constructed, and a stable BHK-21 cell line expressing sheep NYD-SP27 gene was established.
【作者单位】： 石河子大学生命科学学院;石河子大学动物科技学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31460683)
【分类号】：S826.2

【参考文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2248826