猪CREB-H基因表达特征及其与ApoCⅡ基因表达相关分析

发布时间：2018-09-18 19:11

【摘要】：环腺苷酸结合蛋白H (cAMP-response element binding protein H, CREB-H)是最近鉴定的在肝脏内丰富表达的转录因子,参与调控肝脏脂质代谢相关基因的表达。而载脂蛋白C2 (Apolipoprotein C2,ApoCⅡ)作为CREB-H目的调控基因,可激活脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase, LPL),参与甘油三酯的分解过程。本研究利用分子生物学实验技术,一方面在mRNA和蛋白两个分子水平上对猪CREB-H基因的分子作用机理进行了初步研究;另一方面对猪ApoCⅡ mRNA表达与猪CREB-H基因和猪脂质代谢之间的关系进行了初步的探讨。获得如下结果：1.采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测了出生1日龄马身猪12个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃、小肠、小脑、下丘脑、背最长肌、股二头肌、腰大肌)中CREB-H基因相对表达丰度,CREB-H mRNA主要在肝脏和小肠中表达,在其他组织也有较少表达;CREB-H蛋白在肝脏组织中的表达量显著高于其他组织,而在心脏、脾脏、小脑中却不表达。进一步检测了马身猪和大白猪从初生到180日龄7个生长发育期(1 d、30 d、60 d、 90 d、120 d、150 d和180d)肝脏组织中CREB-H基因mRNA和蛋白质相对表达丰度,发现马身猪和大白猪肝脏组织中CREB-H基因mRNA或蛋白相对表达丰度均表现出初生时最高,随日龄的增大,CREB-H mRNA表达呈现周期变化,CREB-H蛋白的表达呈现逐渐下降趋势。同一日龄,马身猪CREB-H蛋白的表达量均极显著高于大白猪(P0.01)。该结果可为研究猪的脂质代谢调控机制提供一定的理论依据。2.采用实时荧光定量PCR技术研究了ApoCⅡ基因在出生1日龄马身猪12个组织中表达特征和在马身猪和大白猪中的发育性表达变化趋势,结果发现ApoCⅡ基因主要在肝脏组织中表达,其mRNA在肝脏组织中的表达具有显著的日龄依赖性和明显的品种差异性,且与CREB-H有极显著的正相关性(P0.01),其表达可能对猪脂质代谢有显著影响。3.利用cAMP类似物(8Br-cAMP)处理了大白猪传代肝细胞,之后利用荧光定量PCR检测了CREB-H和ApoCⅡ的mRNA表达量。结果发现,随着8Br-cAMP浓度的增大,CREB-H和ApoCⅡ表达水平而上升,同时在1 mmol/L 8Br-cAMP诱导下,随着培养时间的延长,CREB-H和ApoCⅡ均表现为先上升后下降,且两基因之间存在显著正相关(P0.05)。该结果可进一步揭示CREB-H的表达调控机制。
[Abstract]:Cyclic adenylate binding protein H (cAMP-response element binding protein H, CREB-H) is a recently identified transcription factor rich in expression in the liver, which is involved in regulating the expression of genes related to lipid metabolism in the liver. Apolipoprotein C2 (Apolipoprotein C2ApoC 鈪，

本文编号：2248843