屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化及其多糖含量的测定

发布时间：2018-10-13 15:25

【摘要】：为提取纯化屎肠球菌(E.faecium)荚膜多糖(CPS)并测定其多糖含量,试验采用高压法破碎菌体,加入核糖核酸酶(25μg/mL)、脱氧核糖核酸酶(0.5mg/mL)、溶菌酶(0.25mg/mL)及蛋白酶K(1.25mg/mL)等去除核酸和蛋白质,得到荚膜多糖粗提物,经过30ku和100ku超滤离心管超滤浓缩和DEAE Sepharose Fast Flow层析柱层析后,得到纯化的屎肠球菌荚膜多糖,再利用苯酚-硫酸法测定其含量。结果表明,成功从屎肠球菌中提取纯化出荚膜多糖,其含量为75.21%,初步确定了屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化方法,为今后相关疫苗的研制奠定了基础。
[Abstract]:In order to extract and purify the capsule polysaccharide (CPS) of Enterococcus faecium (E.faecium) and determine its polysaccharide content, the bacteria were crushed by high pressure method, and the nucleic acid and protein were removed by adding ribonuclease (25 渭 g/mL), deoxyribonuclease (0.5mg/mL), lysozyme (0.25mg/mL) and protease K (1.25mg/mL). The crude extract of capsule polysaccharide was obtained. After ultrafiltration and concentration by 30ku and 100ku ultrafiltration tube and DEAE Sepharose Fast Flow chromatography column chromatography, the purified capsule polysaccharide of Enterococcus faecium was obtained and its content was determined by phenol-sulfuric acid method. The results showed that the capsule polysaccharide was extracted and purified successfully from Enterococcus faecium and its content was 75.21. The method of extracting and purifying the capsule polysaccharide of Enterococcus faecium was preliminarily determined, which laid a foundation for the development of related vaccine in the future.
【作者单位】： 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点试验室农业部草食动物疫病重点开放试验室;
【基金】：国家自然科学基金(31172335)
【分类号】：S859.797

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本文编号：2269111