Nesfatin-1及其mRNA在大鼠生长轴上的表达与作用研究

发布时间：2018-10-16 11:32

【摘要】：Nesfatin-1为一种源于核组蛋白2(NucleobindinⅡ,NUCB2)的厌食肽,广泛的分布于中枢及外周器官。研究表明,Nesfatin-1对摄食、心血管功能、生殖功能、胃肠道功能及胰岛素分泌等方面具有一定的调节作用。鉴于Nesfatin-1摄食有一定程度的影响,而摄食与生长密切相关,本研究旨在研究Nesfatin-1及其mRNA在大鼠生长轴上的表达与作用,为Nesfatin-1在调控动物生长方面的研究提供科学的理论依据。方法:(1)成年雌性SD大鼠(220-250g)5只,处死后取下丘脑、垂体、胰腺、肝脏、肌肉、胃及十二指肠,4%多聚甲醛固定,常规石蜡切片,厚度为5μm,采用免疫组织化学PV-9000两步法染色,光学显微镜下观察并拍照,使用江苏捷达JEDA801D软件分析平均光密度。(2)10d,25d,42d及80d SD大鼠各5只,颈静脉采血,处死后取下丘脑,分别采用实时荧光定量PCR方法及酶联免疫分析方法测定下丘脑NUCB2mRNA及血清Nesfatin-1浓度。(3)25d雌性SD大鼠15只随机分为试验组5只和对照组10只,对照组中有5只不做任何处理饲喂至阴门开启,记录时间(42.67±1.83d)。1%戊巴比妥钠0.5ml腹腔注射,麻醉后固定于大鼠脑立体定位仪,试验组侧脑室注射10μlNesfatin-1(含50pmol),对照组注射10μl的生理盐水,饲喂至试验组阴门开启时(31.83±1.27d),处死试验组所有大鼠及对照组5只大鼠,取下丘脑、垂体、肝脏、胰腺,荧光定量PCR法检测NUCB2 mRNA及下丘脑生长激素释放激素(Growth hormone-releasing hormone,GHRH)、生长抑素(Somatostatin,SS),垂体生长激素(Growth hormone,GH),肝脏生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR),胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factors,IGF-1)及胰腺胰岛素(Insulin,Ins)mRNA表达水平。结果:(1)Nesfatin-1主要分布于大鼠下丘脑的室旁核,背内侧核,室周核,外侧区,弓状核及视上核,腺垂体,胰腺的胰岛和腺泡、肝脏、肌肉、胃的粘膜腺体及十二指肠肠绒毛的结缔组织和小肠腺中,平均光密度分析显示Nesfatin-1在室周核和胰岛显著地高于其他组织(P0.05),胰腺腺泡,肝脏,肌肉及胃则显著地低于其他组织(P0.05),下丘脑背内侧核、外侧区和室旁核高于视上核、弓状核和腺垂体(P0.05)。(2)不同发育阶段大鼠下丘脑中NUCB2 mRNA水平不同,10d最低(P0.05),25d最高且显著高于其他发育阶段(P0.05),血清中Nesfatin-1浓度从10d至80d逐渐升高,但25d与42d组差异不显著(P0.05)。(3)侧脑室注射Nesfatin-1使雌性大鼠初情期显著提前,但不影响其体重,显著抑制了大鼠下丘脑,垂体,肝脏,胰腺中的NUCB2 mRNA水平(P0.05),降低了GHRH、GH、GHR及IGF-1 mRNA水平(P0.05),但显著提高了胰腺中Ins mRNA水平(P0.05)。结论:(1)Nesfatin-1广泛分布于下丘脑,垂体,胰腺、肝脏、肌肉、胃及十二指肠中。但Nesfatin-1在不同组织以及同一组织的不同区域中表达存在差异。(2)大鼠血清中Nesfatin-1浓度随着日龄的增加而增加,但其下丘脑NUCB2 mRNA水平却在25d达到峰值。(3)Nesfatin-1抑制大鼠生长轴中NUCB2 mRNA和下丘脑GHRH、SS mRNA,垂体GH、GHR mRNA及肝脏IGF-1 mRNA的表达,促进胰腺Ins mRNA的表达,提示Nesfatin-1对大鼠的生长轴具有一定的调控作用。
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【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.2

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