泰万菌素防控猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外和体内研究

发布时间：2018-10-19 15:58

【摘要】：PRRSV仍然是危害生猪养殖业的重大疫病之一,给全世界的生猪养殖业造成重大的经济损失。PRRSV感染引起母猪流产、产死胎或木乃伊胎以及返情等繁殖障碍问题,公猪精液带毒,各生产阶段的猪均可出现呼吸道症状。感染猪体内持续的病毒血症与临床症状严重程度有相关性,带毒动物可排毒传染周围的易感动物,妊娠母猪处于病毒血症期可发生垂直传播导致胚胎先天感染PRRSV。泰万菌素为泰乐菌素的衍生物,已被多项研究证实可抑制PRRSV的复制,为新一代的兽用抗病毒药物。本研究从体外细胞实验、人工感染猪的病毒血症变化、攻毒保护试验、市场推广应用等方面研究泰万菌素防控PRRS的机理和应用,为生猪养殖业使用该药物防控PRRSV提供参考。体外实验采用0μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml的泰万菌素孵育Marc145细胞,每个浓度梯度设立接种PRRSV组和对照组,接毒组按1%剂量接种PRRSV CH-1r株毒液。试验结果表明,泰万菌素对Marc145无细胞毒性,不影响细胞生长,泰万菌素孵育的接毒组对应TCID_(50)分别为10~(7.22)、10~(6.62)、10~(6.26)、10~(4.68)、10~(2.52)、空白对照组的TCID_(50)为0,泰万菌素在1.0μg/ml浓度时可见PRRSV的CPE减少,泰万菌素50μg/ml浓度能很好的抑制PRRSV复制,与Stuart、M Takagi、Zhao z等人的体外实验结果相一致,本实验发现泰万菌素能抑制PRRSV CH-1r毒株复制,且浓度越高抑制PRRSV复制的能力越强。体内试验为验证泰万菌素对PRRSV人工感染猪的病毒血症的影响,将经ELISA和PCR检测双阴性的仔猪分A、B和C组3组,A组口服150ppm泰万菌素,试验第7天攻毒,A组和B组试验动物分别肌注和滴鼻3ml 10~(5.0) TCID_(50)/m L PRRSV JXA-1株,C组滴鼻和注射等量的生理盐水,攻毒后第0、3、5、7、10、14、21日采血实时荧光RT-PCR检测血液中的PRRSV病毒拷贝数,给药组攻毒后第3天检测血液中病毒拷贝数为0,而阳性对照组在攻毒3天后血液病毒拷贝数达到104,第5天达到最高峰108.5,之后逐渐下降,阴性对照组无病毒血症出现。试验结果表明泰万菌素在体内可抑制PRRSV病毒复制,减少感染猪PRRSV的病毒血症或缩短PRRSV病毒血症持续时间。攻毒保护试验是将ELISA和PCR检测双阴性的25日龄断奶仔猪15头分为A、B、C三组,A组口服给药泰万菌素150ppm,B组为阳性对照,C空白对照。药物组给药7天后和阳性对照组同时分别肌注和滴鼻3ml 10~(5.0) TCID_(50)/ml的PRRSV JXA-1毒株,攻毒当天计为第0天,攻毒后连续21天测量直肠体温,观察各组仔猪的食欲变化,精神状态以及是否死亡;第-7、0、7、14、21天整组称重,对比各组体重增加值和日增重(ADG)。试验过程中如有死亡立即解剖,其余动物在试验结束时安乐死解剖观察脏器病变,并统计肺部病变计分。结果显示A组仅在攻毒第0-2天有发热,第3天基本恢复正常,B组第3-10天体温急剧升高,其中2头仔猪(B1和B5)分别在第11天和12天死亡。肺部病变计分A、B、C三组的平均分分别为16.4、53.2、12.2。田间试验结果显示目前该药物临床主要应用于保育猪和育肥猪的呼吸道疾病预防保健,减少仔猪的死淘率,以及母猪妊娠阶段和哺乳阶段使用降低农场流产率和返情率。获得发明专利的英国伊科动保集团在全球市场泰万菌素的销售额以11%年增长,在中国以18%年增长。总之,体外Marc145细胞试验表明泰万菌素可抑制PRRSV的复制,病毒TCID_(50)降低,口服泰万菌素150ppm攻毒后第3天抽血检测病毒血症为0,口服给药150ppm泰万菌素后攻毒JXA-1株的保护试验表明仅攻毒后2天内有轻微发热、精神沉郁和食欲降低现象,药物组A的日增重高于接毒阳性对照组B和空白对照组C。表明泰万菌素可用于田间控制PRRSV感染,起到抑制PRRSV复制,减少PRRSV病毒血症或缩短PRRSV病毒血症周期,有利于减少感染动物的死亡率和减轻临床症状。
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【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28

【参考文献】