兔出血症病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2018-12-05 19:28

【摘要】：为建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)的TaqMan荧光定量PCR方法,根据RHDV VP60基因保守序列设计1对特异性引物和1条探针,进行条件优化,检测重复性、敏感性和特异性,建立了RHDV TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,标准品浓度在2.8×10~6~2.8×10~2 copies/L范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.8×10~1copies/L的标准品阳性质粒,变异系数小于2%。结果表明,建立的TaqMan荧光定量PCR方法的特异性、敏感性、重复性均达到试验设计要求,能快速检测临床样品中的RHDV,为我国RHDV的检测及其定量检测的相关研究提供了一种可靠的技术工具。
[Abstract]:In order to establish a TaqMan fluorescence quantitative PCR method for rapid detection of rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV), a pair of specific primers and a probe were designed according to the conserved sequence of RHDV VP60 gene. The conditions were optimized to detect reproducibility, sensitivity and specificity. RHDV TaqMan fluorescence quantitative PCR method was established. The results showed that there was a good linear relationship in the range of 2.8 脳 10 ~ (6) ~ (2) 脳 10 ~ (2) copies/L for the standard sample concentration. The lowest positive plasmid of 2.8 脳 10~1copies/L could be detected, and the coefficient of variation was less than 2 ~ (th). The results showed that the specificity, sensitivity and repeatability of the established TaqMan fluorescence quantitative PCR method were up to the requirements of the experimental design, and could be used for rapid detection of RHDV, in clinical samples. It provides a reliable technical tool for the detection and quantitative detection of RHDV in China.
【作者单位】： 四川农业大学动物医学院;四川省动物疫病预防控制中心;动物疫病与人类健康四川省重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(31402222) “十二五”国家科技支撑计划项目(2013BAD12B04) 四川省科技支撑计划项目(2016N20002)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2365349