沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究

发布时间：2018-12-13 14:20

【摘要】：噬菌体是一类病毒,因其主要感染细菌,又叫作细菌病毒。广泛存在于自然界且种类复杂多样。近半个世纪以来,随着养殖密度的增加及抗生素无节制滥用,大量耐药菌株不断出现。噬菌体的天然杀菌能力,可作为治疗细菌感染的有效手段,正被人们广泛关注。本课题运用直接法从聊城市某现代化肉鸡养殖场采集污水、粪便和垫料等样品,分离、鉴定出20株沙门氏菌作为宿主菌。样品经宿主菌悬液富集,利用双层琼脂平板法以及液体纯化法分离并纯化得到3株沙门氏菌裂解性噬菌体PS5、PS8、PS11。通过宿主菌感染实验分别测定了噬菌体宿主谱、效价、温度和PH的稳定性、最佳感染复数、一步繁殖曲线以及4℃保存效价的衰减规律,并测定了噬菌体的抑菌活性及不同时长、不同效价噬菌体处理沙门氏菌的规律。结果将为利用噬菌体防治沙门氏菌提供科学依据,具有重要理论意义和应用价值。研究主要内容如下:1.噬菌体形态学观察以分离到的沙门氏菌为宿主,从样品中分离并纯化出3株噬菌体PS5、PS8和PS11,且均为裂解性噬菌体。经透射电镜观察,噬菌体PS5头长约74.1 nm,宽约74.1nm,属于无尾结构的二十面体;噬菌体PS8头长约70.3 nm,宽约70.3 nm,属于无尾结构的二十面体;噬菌体PS11头长约92.6 nm,宽约92.6 nm,属于无尾结构的二十面体。2.噬菌体宿主谱测定通过对噬菌体PS5、PS8、PS11进行交叉宿主感染实验,测定噬菌体的宿主谱。实验结果显示:噬菌体PS5、PS8只能感染各自的宿主菌,而PS11不仅能感染宿主菌S11,还能感染沙门氏菌S8,是一株宽宿主谱噬菌体。3.噬菌体PS11温度和PH稳定性测定通过设置不同的温度:30、40、50、60、70、80℃和不同的PH:3、4、5、6、7、8、9、10、11分别处理噬菌体PS11原液60 min,测定处理后PS11的感染效价。实验结果显示:噬菌体PS11的适宜温度范围为30-50℃,适宜PH范围为7-9。4.噬菌体PS11最佳感染复数测定通过设置噬菌体PS11感染沙门氏菌S11的不同感染复数:0.01、0.1、1、10、100,测定感染后PS11的效价。实验结果显示:噬菌体PS11对沙门氏菌S11的最佳感染复数为0.1。5.噬菌体PS11一步繁殖曲线测定通过定时取样测定噬菌体PS11感染沙门氏菌S11的效价,绘制出PS11对S11的一步繁殖曲线。实验结果显示:噬菌体PS11的潜伏期约为20 min,裂解期约在20-95min,吸附率为61.4%,平均裂解量为450。6.噬菌体PS11 4℃保存效价衰减规律测定将噬菌体PS11以菌悬液形式4℃保存,每隔10天测定一次效价,直到检测不到效价。实验结果显示:噬菌体PS11菌悬液4℃保存能够保持活性达70天以上,80天内仍然具有活性。7.噬菌体PS11抑菌活性测定通过浊度法测定噬菌体PS11与沙门氏菌S11混合液吸光度OD600nm值的变化。实验结果显示:PS11在初始5 h内抑菌效果十分明显,5 h后,抑制作用减弱,S11浊度上升,但仍低于空白组浊度。8.不同时长、不同效价噬菌体PS11处理沙门氏菌S11不同稀释度的噬菌体PS11液:102、103、104、105、106分别处理沙门氏菌S11 1h、2 h、3 h后,测定沙门氏菌S11的浓度。实验结果显示:噬菌体效价相同时,沙门氏菌S11数量随着处理时间增加而下降,且降低98%左右后保持平衡;处理时间相同时,沙门氏菌数随着噬菌体效价增加而下降,且在降低98%左右保持稳定。
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【学位授予单位】：聊城大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.6

【参考文献】