H3N2亚型犬流感病毒NP蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

发布时间：2018-12-19 10:54

【摘要】：将分离的H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-NP,然后转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE)感受态细胞,经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果显示,大肠杆菌表达的重组NP蛋白的分子量约为61 k Da,与预期相符,并能与犬CIV阳性血清发生特异性反应。将表达的重组NP蛋白进行纯化后,免疫大白兔制备抗NP蛋白多克隆抗体血清,Western blot检测该血清可与CIV的NP蛋白发生特异性反应,间接ELISA检测该多克隆抗体血清的效价达1:30 000,显示了较高的抗体效价。本研究为CIV快速检测方法的建立和流行病学调查奠定了科学依据。
[Abstract]:The nucleoprotein (NP) gene of H3N2 subtype (Canine influenza virus,CIV A/Canine/Nanjing/11/2012 (H3N2) strain was cloned into prokaryotic expression vector p ET28a (), and the recombinant expression plasmid p ET-NP, was constructed. Then the cells were transformed into Escherichia coli E.coli Rosetta (DE) competent cells and induced by IPTG. The results were analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The results showed that the molecular weight of the recombinant NP protein expressed by Escherichia coli was about 61k Da, which was consistent with the expectation, and could react specifically with the canine CIV positive serum. After purification of the expressed recombinant NP protein, the polyclonal antibody against NP protein was prepared from immunized white rabbits to detect the specific reaction between the serum, Western blot and the NP protein of CIV. The titer of the polyclonal antibody was 1:30 000 by indirect ELISA, which showed a high titer of the polyclonal antibody. This study provides a scientific basis for the establishment of rapid detection of CIV and epidemiological investigation.
【作者单位】： 江苏省农业科学院兽医研究所
【基金】：江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(15)1065)
【分类号】：S852.655

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