三源重组H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的建立

发布时间：2018-12-27 08:35

【摘要】：利用RT-PCR技术扩增三源重组H1N1亚型猪流感病毒A/Swine/Tianjin/10/2013(H1N1)的8个基因片段,分别克隆至双向转录/表达载体p BD上。将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞,收取转染48 h后的细胞上清并接种MDCK细胞,成功拯救出有血凝活性的病毒。全基因序列测定结果表明,拯救病毒与野生病毒的核苷酸序列完全一致。生长曲线的测定结果表明,不同时间点野生毒株与拯救毒株在MDCK细胞上的病毒滴度没有明显差异。三源重组H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的成功建立为进一步开展猪流感病毒的生物学特性研究奠定了基础,同时也为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。
[Abstract]:Eight gene fragments of recombinant H1N1 subtype A/Swine/Tianjin/10/2013 (H1N1) were amplified by RT-PCR and cloned into bidirectional transcriptional / expression vector p BD. Eight recombinant plasmids were purified and cotransfected into 293T cells. The supernatants were collected and inoculated into MDCK cells after 48 hours of transfection. The virus with hemagglutination activity was successfully saved. The results of whole gene sequencing showed that the nucleotide sequence of rescue virus and wild virus were identical. The results of growth curve showed that there was no significant difference in the titers of wild and rescue strains in MDCK cells at different time points. The successful establishment of the reverse genetic operation platform for the recombinant H1N1 subtype swine influenza virus laid a foundation for further research on the biological characteristics of swine influenza virus and opened a new way for the development of H1N1 subtype swine flu vaccine.
【作者单位】： 中国农业科学院上海兽医研究所;
【基金】：上海市自然科学基金青年项目(16ZR1444000) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2015JB07) 闵行领军人才队伍建设专项资金 中国农业科学院创新工程“猪病毒性繁殖障碍综合症团队”项目
【分类号】：S852.651

【参考文献】

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【共引文献】

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