梅山猪胚胎附植期EphrinA1和EphB2基因的全编码区克隆和表达分析

发布时间：2019-01-02 08:01

【摘要】：为了研究繁殖性状相关基因促红细胞生成素产生肝细胞配体A1受体(EphrinA1)和受体B2(EphB2)对梅山猪猪胚胎附植、产仔数的影响,本文进行了如下的研究.1.胚胎附植期梅山猪EphrinA1全编码区克隆、表达及其生物信息学分析(目的):为了研究促红细胞生成素产生肝细胞配体A1(EphrinA1)对梅山猪胚胎附植期胚胎和子宫内膜间迁移和粘附活动的影响。(方法):本文以梅山猪胚胎附植期子宫内膜附植点为试验对象,利用克隆测序、生物信息学和qRT-PCR方法,克隆了EphrinA1基因的全长编码序列,对其蛋白结构和功能等进行了预测,还检测了其mRNA表达变化。(结果):结果表明,梅山猪EphrinA1基因编码区发现5个cSNPs变异,在外显子1上有两个突变分别是G89A、G91C,在外显子2上也有两个突变分别是T101C、A208G,在外显子4上发生了一个突变是G526A,其中2个导致氨基酸突变,分别为Glu29Asn和Trp33Arg,位于EphrinA1外显子1和外显子2上。在EphrinA1编码序列中含有5个外显子,一共编码了 205个氨基酸,从这205个氨基酸的理化性质分析可得到EphrinA1为不稳定的亲水性蛋白,有1个信号肽和一个保守区域,无跨膜区。由此可以推断出,这些特性有可能是Glu29Asn,Trp33Arg突变引起一些蛋白的特异性结合,从而会影响到EphrinJ1基因功能。另外,EphrinA1在梅山猪胚胎附植期有较强的mRNA表达,EphrinA1在胚胎附植期(第13-24天)的mRNA表达趋势为先升高后降低,即在胚胎附植早期至中期的过程中表达量持续升高,在胚胎附植中期至晚期的过程中表达量持续降低。且妊娠第18天的表达量极显著高于其它妊娠日龄(P0.05),这些表达量EphrinA1的mRNA表达在梅山猪胚胎附植调控中可能发挥了一定的作用。EphrinA1的mRNA高表达量是否参与了梅山猪的胚胎附植调控,还需要在细胞水平上通过基因过量表达和沉默技术进行分析。(结论):通过对梅山猪EphrinA1基因全编区克隆、表达及生物学分析所得的数据显示这些可能参与梅山猪的胚胎附植调控,影响了EphrinA1基因的功能,其cSNPs有望成为影响猪产仔数基因的潜在分子标记。2.梅山猪胚胎附植期EphB2的组织表达分析(目的):促红细胞生成素产生肝细胞受体B2(EphB2)在多种细胞的迁移和侵入活动中发挥作用。EphB2作为Eph-Ephrin家族中的受体一员,在多种细胞的迁移和粘附活动中发挥作用,有研究报道EphB2过量表达会使人神经胶质瘤细胞的粘附能力降低,并使细胞的侵入能力增加。为了研究EphB2对猪胚胎附植期胚胎和子宫内膜间迁移和粘附活动的影响。(方法):本文以太湖流域梅山猪为试验对象,利用实时荧光定量PCR方法和Western blot方法,分析了该基因在梅山猪胚胎附植前、中、后期子宫内膜和卵巢组织的mRNA和蛋白表达谱。(结果):在猪子宫内膜附植点和附植点间,EphB2在胚胎附植期(第13-24天)的mRNA表达趋势基本保持一致,都是先升高后降低,且妊娠第18天的表达量极显著高于其它妊娠日龄(P0.01),在卵巢中,EphB2在胚胎附植期的mRNA表达趋势为先降低后升高,且妊娠第18天的表达量显著低于其它妊娠日龄(P0.01)。这与子宫内膜中的表达趋势相反。另外,同一胚胎附植时期(妊娠第18天),子宫内膜附植点的表达量极显著高于子宫内膜附植点间和卵巢组织(P0.01)。EphB2在子宫内膜附植点和附植点间的蛋白表达曲线均呈先升高后降低的趋势,即在胚胎附植早期至中期的过程中表达量持续升高,在胚胎附植中期至晚期的过程中表达量持续降低。由此得出EphB2在胚胎附植期猪子宫内膜的mRNA和蛋白均呈现先升高后降低的表达趋势,且附植中期的表达量显著高于前期和后期(P0.01);而EphB2在卵巢中的表达趋势则相反,为先降低后升高。(结论):EphB2很可能在猪胚胎附植过程中发挥着重要的调控作用,可成为潜在的猪产仔数性状候选基因。综上所述,Ephrin41和EphB2基因在梅山猪的胚胎附植期都有着比较高的表达量,可能对猪的胚胎附植发挥着一定的调控作用,可成为猪产仔数性状候选基因。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S828

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本文编号：2398234