禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的建立

发布时间：2019-02-17 08:48

【摘要】：利用RT-PCR技术扩增了禽源H9N2亚型猪流感病毒A/Swine/Guangxi/7/2007(H9N2)的8个目的基因片段,分别克隆至pBD双向转录表达载体。将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞,54 h后收集上清,接种MDCK细胞。当拯救的病毒在MDCK细胞上增殖至第3代时,收集的细胞上清经检测具有血凝效价。经过测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与野生株完全一致,表明病毒拯救成功。禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的成功建立为探索猪流感病毒致病机理、传播机制与基因功能研究奠定了基础。
[Abstract]:Eight target gene fragments of avian H9N2 subtype swine influenza virus A/Swine/Guangxi/7/2007 (H9N2) were amplified by RT-PCR and cloned into pBD bidirectional transcriptional expression vector. Eight recombinant plasmids were purified and transfected into 293T cells. The supernatants were collected and inoculated into MDCK cells 54 h later. When the rescued virus proliferated into the third passage of MDCK cells, the supernatant of the collected cells showed hemagglutination titer. The sequence analysis showed that the sequence of 8 gene fragments of the rescued virus was completely consistent with that of the wild strain, which indicated that the virus was successfully rescued. The successful establishment of the platform for reverse genetic manipulation of avian H9N2 subtype swine influenza virus lays a foundation for exploring the pathogenic mechanism, transmission mechanism and gene function of swine influenza virus.
【作者单位】： 中国农业科学院上海兽医研究所;
【基金】：上海市自然科学基金青年项目(16ZR1444000) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2015JB07) 中国农业科学院创新工程“猪病毒性繁殖障碍综合症团队”项目
【分类号】：S852.651

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 邓小芸;祁小乐;高玉龙;高宏雷;秦立廷;高立;王永强;王笑梅;;网状内皮组织增生病病毒反向遗传操作系统的建立[J];中国预防兽医学报;2010年09期

2 张鹏飞;杜山;李云章;;反向遗传操作技术在流感病毒研究中的应用[J];畜牧与饲料科学;2008年02期

3 朱春生;赵建军;闫喜军;王伟;;动物负链RNA病毒反向遗传操作的构建策略及应用[J];中国兽医科学;2013年04期

4 周生;姜逸;程旭;沈欣悦;李建梅;尤素兰;赵宝华;戴亚斌;;鸡传染性支气管炎病毒反向遗传技术研究进展[J];中国家禽;2014年04期

5 张乾义;张莹;胡永浩;娄慧;姜永萍;李雁冰;田国斌;邓国华;施建忠;关云涛;杨焕良;陈化兰;;甲型H1N1流感病毒A/Sichuan/01/2009株反向遗传操作系统的建立[J];中国兽医科学;2011年05期

6 石火英;张小荣;孙学辉;刘慧谋;刘秀梵;;反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验[J];中国家禽;2005年17期

7 高飞;姚火春;孙志;王金勇;袁世山;;猪生殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区序列的反向遗传操作[J];中国兽医科学;2007年08期

8 王学理;王兴龙;李晓艳;任林柱;;反向遗传操作在新城疫病毒中的应用[J];中国兽医学报;2008年05期

9 智海东,王云峰,童光志;反向遗传操作在新城疫病毒中的应用[J];畜禽业;2003年01期

10 杨涛;徐青元;孙恩成;冯瑜菲;李俊平;孙亮;孙晶;吴东来;;蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立[J];中国预防兽医学报;2014年02期

相关会议论文 前10条

1 翁晓刚;朱要宏;王九峰;;反向遗传操作在牛病毒性腹泻病毒研究上的应用[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集（上册）[C];2011年

2 袁世山;高飞;孙志;姚火春;秦爱健;;正链RNA病毒反向遗传操作系统的建立及应用[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

3 刘开永;侯玉泽;李松彪;李道敏;杨晓花;张其艳;;狂犬病毒的反向遗传操作技术研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

4 袁世山;高飞;姚火春;孙志;谭涛;秦爱健;陆承平;;猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒反向遗传操作系统的建立及应用[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

5 高飞;姚火春;孙志;王金勇;袁世山;;猪繁殖与呼吸综合征病毒5’非翻译区序列的反向遗传操作[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集[C];2007年

6 周生;唐梦君;戴亚斌;刘梅;程旭;吕晓娟;;禽传染性支气管炎病毒H120株反向遗传操作系统的建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

7 唐梦君;周生;戴亚斌;程旭;沈欣悦;刘梅;徐玲霞;尤素兰;;肾型鸡传染性支气管炎病毒IBYZ株反向遗传操作系统的建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2012年

8 孙玉章;丁壮;孟柯音;丛彦龙;母连志;王昌庆;李少丽;;鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）[C];2009年

9 孙玉章;丁壮;孟柯音;丛彦龙;母连志;王昌庆;李少丽;;鹅源副黏病毒NA-1株反向遗传操作体系的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年

10 李少丽;王昌庆;丛彦龙;丁壮;孙玉章;;拯救NA-1株GPMV微型基因组的构建及鉴定[A];禽类新发传染病高层论坛论文集[C];2009年

相关博士学位论文 前4条

1 祁小乐;鸡传染性法氏囊病病毒反向遗传操作系统的建立及基因功能研究[D];中国农业科学院;2007年

2 葛金英;新城疫病毒反向遗传操作基础与应用研究[D];南京农业大学;2006年

3 张永国;禽流感及汉坦病毒反向遗传操作体系建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

4 张新涛;新城疫病毒NDV4-C株反向遗传操作系统的建立及耐热应用研究[D];中国农业科学院;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 闫大为;坦布苏病毒MM1775株反向遗传操作系统的建立及拯救病毒的生物学特性研究[D];中国农业科学院;2015年

2 陈玲;IBDV毒力分子机制研究及反向遗传操作系统的建立[D];中国兽医药品监察所;2015年

3 吴晓刚;鸭坦布苏病毒弱毒株反向遗传操作系统的建立[D];中国农业科学院;2014年

4 郭清华;应用新城疫病毒反向遗传操作系统—构建L表达质粒[D];内蒙古师范大学;2010年

5 郭静;新城疫病毒TS09-C株反向遗传操作系统的构建及其初步应用[D];华中农业大学;2013年

6 丛雁方;猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）蛋白编码基因区的反向遗传操作[D];中国农业科学院;2009年

7 高立;利用反向遗传操作技术构建IBDV候选疫苗株的研究[D];中国农业科学院;2010年

8 冯华朋;H5N1亚型流感病毒A/Anhui/2/2005株反向遗传操作系统的建立及埃及H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建[D];中国农业科学院;2010年

9 王帅;一株H4N2亚型禽流感病毒生物学特性研究及反向遗传操作系统构建[D];中国农业科学院;2014年

10 范俊;H9N2亚型禽流感病毒生物学特性分析及PR8八质粒反向遗传操作系统的构建与候选疫苗株的制备[D];中国农业科学院;2013年

，

本文编号：2424984