禽流感病毒M2蛋白抑制细胞自噬体降解的研究

发布时间：2019-03-05 16:05

【摘要】：为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot的方法检测细胞自噬体及自噬流情况。自噬体检测结果表明,AIVM2蛋白能够诱导转染细胞内自噬体积累。通过LC3-IIturnover试验、mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统以及pEGFP-LC3与LAMP1的共定位检测进一步证明,M2蛋白通过阻断自噬体与溶酶体融合,抑制溶酶体对自噬体的降解从而诱导自噬体积累。本研究揭示AIVM2蛋白对细胞自噬的发生具有重要作用,为深入研究自噬在A型流感病毒复制中的调节作用奠定基础。
[Abstract]:In order to investigate the effect of avian influenza virus (AIV) M2 protein on autophagy, recombinant plasmids of pEGFP-LC3 and pCAF-M2 were constructed and co-transfected into 293T cells or Hela cells by lipofectamine. At the same time, the autophagy and autophagy were detected by indirect immunofluorescence and westernblot in cells transfected with these two recombinant plasmids as control group. Autophagy assay showed that AIVM2 protein could induce the accumulation of autophagy in transfected cells. LC3-IIturnover test, mRFP-GFP-LC3 double fluorescence indicator system and co-localization of pEGFP-LC3 and LAMP1 further demonstrated that M2 protein could block the fusion of autophagy and lysosome. Inhibition of lysosome degradation of autophagy and induction of autophagy accumulation. This study reveals that AIVM2 protein plays an important role in the occurrence of autophagy and lays a foundation for further study on the regulation of autophagy in the replication of influenza A virus.
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室;
【基金】：国际合作项目(2014DFR31260) 国家重点研发计划(2016YFD0500800)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2435079