猪肺泡Ⅱ型上皮细胞（PAECⅡ）的分离纯化及感染HP-PRRSV的研究

发布时间：2019-03-31 08:39

【摘要】：肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell)是构成哺乳类动物肺泡上皮的主要细胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物质的主要细胞。肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)几乎为所有肺脏细胞的始祖。猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)是一种具有囊膜、单股正链的RNA病毒,分类于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属,是猪繁殖和呼吸系统障碍综合征(PRRS)的病原体。PRRSV感染的主要细胞是免疫系统的巨噬细胞、淋巴细胞。在肺脏中,PRRSV感染的靶细胞PAM为公认的首选研究对象,而PRRSV感染PAECⅡ的研究仍显薄弱。本实验通过灌洗仔猪肺脏然后使用免疫粘附法分离纯化PAECⅡ,通过碱性磷酸酶染色及电镜观察确定PAECⅡ的纯度。最后以HP-PRRSV感染PAECⅡ作为研究对象,检测感染后不同时间点细胞内PRRSV的N蛋白变化,探究HP-PRRSV能否感染PAECⅡ。研究结果如下:1.通过肺灌洗及弹性蛋白酶消化法分离PAECⅡ,然后采用免疫粘附法进一步对PAECⅡ进行纯化,利用碱性磷酸酶染色及透射电镜对其进行纯度及特征的确定。结果显示,弹性蛋白酶消化和IgG粘附可以产生较高纯度的PAECⅡ,电镜下可以观察到PAECⅡ表面有微绒毛,细胞内有其特异性结构板层小体,说明所分离的细胞是PAECⅡ细胞。2.HP-PRRSV感染PAECⅡ后分别对0h,12h,24h的细胞进行间接免疫荧光实验和western blot实验。间接免疫荧光实验在12h,24h检测到细胞内有绿色荧光,western blot实验在12h,24h均有PRRSV的N蛋白表达。通过间接免疫荧光实验和western blot实验证实HP-PRRSV能够感染PAECⅡ。
[Abstract]:Alveolar type 鈪，

本文编号：2450746