多种剂型乳酸菌介导RegⅢγ黏膜免疫分子机制研究

发布时间：2019-04-03 21:11

【摘要】：肠道上皮屏障是机体最大的黏膜屏障,某些肠道上皮细胞产生的胰岛再生源蛋白Ⅲγ(regener-ating islet-derived protein Ⅲγ,RegⅢγ)在肠道固有免疫中起到重要作用。过去的研究发现白介素23、22(IL-23/IL-22)等细胞因子及髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)能够促进RegⅢγ的表达。正常条件下的肠道RegⅢγ有效降低炎症进程,促进组织损伤的修复,在抵御和降低炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)的发病及发展中发挥重要作用。乳酸菌作为肠道内共生的优势菌群,可通过对肠道上皮的相互作用,刺激肠上皮细胞活化,促进树突状细胞成熟,进而引起肠道防御屏障的激活,达到增强肠道免疫防御功能,维持机体健康的作用。然而乳酸菌是如何作用肠道上皮产生RegⅢγ的机理尚不明确,且其对IBD炎症过程的作用及机理仍不清晰。本研究通过检测分析乳酸菌对小鼠干预后,体内RegⅢγ表达量的变化,以及乳酸菌对IBD炎症过程机体中各炎性因子变化量的影响。探讨乳酸菌介导RegⅢγ表达的作用机理,及其在肠炎黏膜免疫中的免疫防御功能及拮抗作用的分子机制。研究内容如下:(1)不同剂量混合乳酸菌对健康小鼠肠道RegⅢγ表达量的影响本试验在前期研究基础上,选取有较强益生作用的混合乳酸菌,分高、低剂量对健康小鼠进行干预,通过荧光定量PCR、流式细胞术、酶联免疫吸附试验及免疫组化技术,检测干预小鼠肠道中RegⅢγ及诱导其产生的活化树突状细胞、MyD88、IL-23、IL-22细胞因子表达量的变化,探索不同剂量乳酸菌在健康小鼠体内诱导RegⅢγ分泌的分子机制,并对比筛选出乳酸菌免疫的最佳剂量。结果表明:混合乳酸菌在健康小鼠肠道定植后RegⅢγ的表达量显著增高,与对照组比较差异显著(P0.05),其混合乳酸菌干预后小鼠体内活化树突状细胞数量明显增高,与对照组比较差异显著(P0.01)。伴随活化树突状细胞数量的增加,小鼠肠道内IL-23、IL-22及MyD88的表达量也显著高于对照组(P0.01)。试验同时证明,不同剂量的乳酸菌中,高剂量乳酸菌对肠道的免疫作用更强。(2)混合乳酸菌诱导的RegⅢγ在溃疡性结肠炎黏膜免疫中的作用研究IBD是一种慢性的炎症性肠病,其成因复杂且治疗难度大。而乳酸菌作为肠道益生菌已经被证明能够增强机体肠道免疫能力。抗菌蛋白RegⅢγ作为肠道先天免疫中重要的免疫因子,对肠道的保护功能越来越受到人们的关注。因此本研究在前期工作的基础上,选用筛选出的具有良好益生活性的高剂量混合乳酸菌对健康小鼠进行干预,通过IFA、组织切片HE染色、ELISA等实验技术,检测肠道中RegⅢγ、MPO及血清中SAA的表达变化,同时监测肠道病理变化,以探讨口服高剂量混合乳酸菌后的小鼠对DSS造成的溃疡性肠炎的黏膜免疫作用。结果显示:在肠炎模型中RegⅢγ表达量显著升高(P0.005),但乳酸菌组RegⅢγ的量显著下调(P0.01)。研究进一步证实,在对肠道病理检测、肠道炎性因子MPO及全身炎症反应物SAA的检测中,乳酸菌组的检测结果均显著低于DSS组(P0.01),(P0.05)。以上共同说明,通过前期乳酸菌的预防干预,能够提高机体对DSS造成的肠炎的抵抗作用,这可能与乳酸菌前期干预产生的RegⅢγ有关。综上所述,混合乳酸菌能够在一定程度上活化树突状细胞,进而上调IL-23、IL-22及MyD88的表达量,增加RegⅢγ的分泌。在这一过程中,高剂量混合乳酸菌显示出更高效的介导作用。进一步研究表明,在DSS引起的肠炎过程中,高剂量混合乳酸菌介导RegⅢγ免疫反应能够起到抑制炎症因子,降低炎症反应的作用。
[Abstract]:The intestinal epithelial barrier is the largest mucosal barrier in the body. Previous studies have found that cytokines such as interleukin 23,22 (IL-23/ IL-22) and myeloid differentiation factor 88 (MyD88) can promote the expression of Reg 鈪，

本文编号：2453585