娄底市猪链球菌的流行病学调查及多重PCR诊断方法的建立

发布时间：2019-04-17 11:29

【摘要】：根据荚膜抗原分型,可将猪链球菌分为33个血清型。这种可形成链状的革兰氏阳性细菌广泛分布于全球,对养猪业造成了巨大的经济损失,同时也被中国列为2类动物疫病,为人畜共患病原。由于血清型较多抗原复杂,常常给诊断带来困难,其引起的临床症状也是多种多样的,如：急性败血症、脑膜炎、心内膜炎、肺炎、关节炎。目前,全球已经超过30多个国家报道猪或是人感染猪链球菌,然而,了解猪链球菌的分布情况,不仅是为了弄清其如今流行的形势,更是为了评估当前区域流行的原因。本研究旨在了解娄底地区猪链球菌流行情况,并根据调查结果针对娄底地区的调查结果建立多重PCR诊断方法,为猪链球菌的防治提供科学依据。从娄底市的娄星区、新化县、涟源市、双峰县、冷水江市等地采集猪鼻拭子400份,经增菌分离培养、革兰染色镜检、PCR鉴定猪链球菌种及分离菌株血清型鉴定。结果表明,从400份鼻拭子样品中共检出有239份猪链球菌阳性样品,阳性率为59.75%,本次共检出21个型的猪链球菌,分别是1型、2型、3型、4型、5型、7型、8型、10型、11型、13型、15型、17型、18型、20型、21型、23型、26型、28型、29型、30型、31型。其中,猪链球菌3型的检出率最高,达8.25%,其余检测率较高的依次为：2型达6.75%,8型达5.75%,7型达4.75%,23型达4.50%,21型达3.75%,10型达3.25%,1型达2.00%,26型达1.50%,11型达1.00%。由此表明,娄底市正常猪群中猪携带的猪链球菌血清型呈现复杂多样的特点。根据娄底市流行病学调查的情况,建立猪链球菌3型、8型、21型及23型的多重PCR诊断方法。参考GenBank上已登录序列,针对猪链球菌特异性基因(荚膜多糖,3型CPS3L,8型CPS8K,21型CPS21I,23型CPS23J)设计合成4对引物,预计扩增片段大小分别为：210,278,618,487bp。通过设置巴氏杆菌,丹毒丝菌,葡萄球菌,大肠杆菌和水来验证多重PCR方法的特异性；用猪链球菌3型、8型、21型及23型来验证多重PCR方法的准确性；梯度稀释模板来确定多重PCR方法的敏感性；结果表明,多重PCR方法在退火温度为55℃可以扩增出4条大小符合预期的条带。方法的特异性和准确性都预期相符,敏感性为1.2×102CFU/mL。5次重复性实验结果一致。本次所建立的多重PCR方法高效,适合用来监测娄底市的养猪场的猪链球菌流行情况。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28

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本文编号：2459384