羊口疮病毒B2L和F1L基因的表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2019-05-07 17:06

【摘要】：羊口疮又称羊传染性脓疱性皮炎,由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起,ORFV属于痘病毒科副痘病毒属,主要侵袭皮肤和黏膜。ORFV主要感染绵羊和山羊等动物,严重影响养羊业的发展,对人类健康也造成威胁。可以通过接种疫苗来控制羊口疮的发生,但存在灭活苗效果差,弱毒苗毒力返强等问题,而且不同地区的羊口疮毒株存在差异,不能很好的保护羊群。因此,对本地区的ORFV开展研究具有重要意义。1.采集海南某场羊口疮水泡痂皮,克隆ORFV的B2L、VIR和F1L基因,进行遗传进化树分析。结果表明,发现其与福建株和西北株的亲缘关系较近。2.以ORFV基因组为模板,通过PCR技术扩增B2L和F1L片段,构建原核表达质粒 pET28a-B2L 和 pET28a-F1L,通过 Ni-NTA 柱纯化 His-B2L 和 His-F1L 融合蛋白,进行SDS-PAGE和Western Blot检测。结果表明,成功构建重组质粒pET28a-B2L和pET28a-F1L,经IPTG诱导成功表达了带His标签的融合蛋白,融合蛋白His-B2L分子量约47 kDa,融合蛋白His-F1L分子量约44 kDa。3.通过PCR技术扩增B2L和F1L片段,构建真核表达质粒pEGFP-N1-B2L和pEGFP-N1-F1L,转染羊睾丸细胞,进行荧光显微镜观察,qRT-PCR检测和Western Blot鉴定。结果表明,成功构建了真核表达质粒pEGFP-N1-B2L和pEGFP-N1-F1L,成功表达了 EGFP-B2L和EGFP-F1L融合蛋白,为B2L和F1L蛋白的研究奠定基础。4.用纯化的融合蛋白制备抗原,经皮下多点注射新西兰大白兔,制备兔抗His-B2L和His-F1L多克隆抗体,用ELISA方法检测多克隆抗体效价。结果表明,获得的兔抗多克隆抗体效价均在1:12800以上且具有较好的特异性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：海南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 姚俊;李富祥;彭海生;鲁富有;张乔明;李华春;;羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J];动物医学进展;2012年11期

2 ;农业部公布一、二、三类动物疫病病种名录[J];中国动物检疫;1999年02期

相关会议论文 前1条

1 贾慧娜;罗海玲;;多克隆抗体制备方法的研究进展[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年

相关硕士学位论文 前9条

1 李娜;羊口疮病毒的致弱与灭活苗的初步研究[D];内蒙古农业大学;2016年

2 周铭;羊口疮病毒文登株和石林株毒力致弱及毒力相关基因的生物信息学分析[D];西北农林科技大学;2016年

3 李旭东;羊传染性脓疱实时荧光定量PCR方法的建立[D];内蒙古农业大学;2015年

4 刘方;杨凌地区羊口疮流行病学调查、病毒分离鉴定及相关基因的生物信息学分析[D];西北农林科技大学;2014年

5 李杰;羊口疮抗体ELISA检测方法的建立及应用[D];西北农林科技大学;2013年

6 王改丽;RNAi抑制羊传染性脓疱病毒增殖效果的研究[D];吉林大学;2012年

7 李宏;羊口疮病毒ORFV086基因编码病毒颗粒结构蛋白的遗传和免疫学特性的鉴定[D];南方医科大学;2012年

8 张海瑞;羊口疮病毒的分离鉴定及其ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2011年

9 乔永;湖羊羔羊不同部位肌肉肌内脂肪沉积相关基因表达的发育性变化研究[D];南京农业大学;2007年

，

本文编号：2471247