类固醇激素及其拮抗剂对3T3-L1前脂肪细胞增殖及其脂滴形成的影响

发布时间：2019-05-14 21:29

【摘要】：长期以来,脂肪组织一直被认为是仅供能量贮备的终末分化器官。然而,随着瘦素、脂肪源性的肿瘤坏死因子-α、脂联素和抵抗素等的发现,有学者提出脂肪组织是一个内分泌器官。在过去的十几年里,脂肪组织的分泌功能及其作为内分泌器官在机体的许多生理和病理过程中的作用已倍受关注。因此,作为脂质中心和能量代谢枢纽的脂滴,也越来越受到人们的关注。在脂肪细胞、肝细胞、肾上腺皮质以及肌肉细胞等许多组织细胞中都有脂滴的存在。脂肪细胞与肝细胞内的脂滴是能量储存的重要场所,肾上腺皮质内的脂滴供给甾体激素合成需要的原料,而巨噬细胞内的脂滴可能在炎症反应中发挥着关键作用。这提示我们,脂滴在不同的细胞内功能方面也存在差别。本课题组其他几项研究发现:分娩期山羊及小鼠宫颈中都含有脂肪细胞,且能够分泌影响分娩期子宫颈成熟和分娩的前列腺素E2(PGE2),同时还在分娩期小鼠宫颈中发现分娩期脂肪细胞内脂滴体积变大,数量变多。分娩期宫颈脂肪细胞中脂滴的这一变化是否与分娩期激素水平变化有关,就目前关于分娩期子宫颈中脂肪细胞脂滴变化原因方面来看国内外尚未有此类报道。因此本实验的目的就是初步验证与生殖相关激素对脂肪细胞增殖及脂滴形成的影响,以期能揭示在分娩期宫颈中脂肪细胞的来源与脂滴变化的原因。本实验以3T3-L1小鼠成纤维细胞系为研究对象,将3T3-L1小鼠成纤维细胞的增殖及分化作为主要研究内容。对3T3-L1小鼠成纤维细胞进行传代培养、冻存及复苏。将在生长对数期的细胞以每孔4000~5000水平接入96孔板,12 h细胞贴壁后加入含不同摩尔浓度(10 nm/L、20 nm/L、40 nm/L、80 nm/L)孕酮、米非司酮、孕酮+米非司酮、雌激素、地塞米松的5%FBS DMEM培养基或无FBS DMEM培养基继续培养12 h、24 h、48 h,用MTT法、在490 nm光度值下检测孕酮、米非司酮、孕酮+米非司酮、雌激素、地塞米松对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。结果显示在12 h和24 h时,5%FBS组和无FBS组的孕酮组、米非司酮组的各浓度组均起促进作用,且成剂量依赖性。在12 h和24 h时,5%FBS组和无FBS组的孕酮+米非司酮组的10 nm/L、20 nm/L组均起促进作用;5%FBS组和无FBS组的孕酮+米非司酮组的40 nm/L、80 nm/L浓度组在12 h、24 h和48 h时都呈现强烈的抑制作用。在12 h和24 h时,5%FBS组的雌激素组作用不明显,但在48 h时也呈现抑制作用;在12 h和24 h时,无FBS组的雌激素组各浓度组均起促进作用,但在48 h时也呈现抑制作用;地塞米松不论是5%FBS组还是无FBS组在12 h、24 h、48 h时都呈现抑制作用,且无剂量依赖性。同时通过5%FBS组和无FBS组之间的对比发现,各激素在无FBS时作用发挥较明显。以上这些结果表明:FBS在细胞生长过程中起着重要的作用;孕酮、米非司酮促进3T3-L1前脂肪细胞的生长,使其提前退出生长对数期转入衰退期,而在48 h显示抑制作用;孕酮与其拮抗剂米非司酮共同作用时低剂量可促进3T3-L1前脂肪细胞的生长,高剂量抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长;雌激素和地塞米松抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长。采用经典鸡尾酒诱导法对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,在诱导分化同时加入不同摩尔浓度(10 nm/L、20 nm/L、40 nm/L、80 nm/L)孕酮、米非司酮、孕酮+米非司酮、雌激素、地塞米松,在分化的2 d、4 d、6 d用油红O染色在倒置显微镜下进行拍摄观察,结果显示,随着时间的延长,加FBS组与无FBS组相比,其细胞数和脂滴数均比无FBS组多,表明FBS在细胞的生长和分化过程中都是重要的营养因素。与阴性5%FBS组和无FBS组对照组相比,随着时间的延长,孕酮、雌激素、地塞米松组脂滴量逐渐增多,促进3T3-L1细胞分化;孕酮和米非司酮共同作用组、米非司酮组脂滴量较少,抑制3T3-L1细胞分化。
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【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.2

【参考文献】