重组大肠杆菌DH5α-pCAGGoptiHA5培养基优化及高密度培养

发布时间：2019-05-22 20:34

【摘要】：为提高重组质粒的生产效率,利用响应面分析中的Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验,对影响该工程菌质粒表达的培养基组分进行筛选和优化,以确定该工程菌的最佳培养基组分。结果显示:蔗糖、硫酸铵分别为最佳碳源、无机氮源;酵母浸粉、蔗糖和(NH4)2SO4最佳质量浓度分别为7.50,17.50,7.50g/L。在相同培养条件下,优化后培养基质粒产量是LB培养基质粒产量2倍。使用100L反应器高密度培养时利用优化的培养基发酵培养重组大肠杆菌,质粒质量浓度达到115.25mg/L,比优化前提高88.52%,质粒各项指标稳定,免疫原性优良。此试验数据为规模化生产提供参考数据。
[Abstract]:In order to improve the production efficiency of recombinant plasmid, the components of culture medium affecting the expression of plasmid were screened and optimized by Plackett-Burman test, steepest climbing test and Box-Behnken test in response surface analysis. In order to determine the optimum medium composition of the engineering bacteria. The results showed that sucrose and ammonium sulfate were the best carbon sources and inorganic nitrogen sources, respectively, and the optimum concentrations of yeast powder, sucrose and (NH4) 2SO4 were 7.50g 路L ~ (- 1), 7.50g 路L ~ (- 1) and 7.50g 路L ~ (- 1), respectively. Under the same culture conditions, the grain yield of the optimized culture medium was twice as much as that of LB culture. The recombinant Escherichia coli was cultured in high density culture medium in 100L reactor. The mass concentration of plasmid reached 115.25mg / L, which was 88.52% higher than that before optimization. The indexes of plasmid were stable and the immunogenicity of recombinant Escherichia coli was excellent. This test data provides reference data for large-scale production.
【作者单位】： 吉林大学动物医学学院;天津瑞普生物技术股份有限公司;
【基金】：国家国际合作专项(2014DFA31180) 国家公益性行业(农业)科研专项(31372463)
【分类号】：S852.61

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本文编号：2483239