鹅细小病毒与鸭圆环病毒共感染诱发鸭大舌—短喙综合征

发布时间：2019-07-08 19:52

【摘要】：自2015年3月份以来,山东、江苏、安徽、河南等地区的商品肉鸭中发生了以雏鸭的生长发育缓慢,上下鸭喙萎缩,舌头肿胀,僵硬及向外伸出弯曲综合病症,该病的致死率较低,发病率可达15%-45%,采食量严重下降,感染后期在抓捕时腿部及翅膀的骨骼容易造成骨折,给养殖户造成重大的经济损失,该病被命名为“鸭大舌-短喙综合征”。2015年12月,山东菏泽、肥城地区某养殖规模各大约为6500只鸭场鸭群中出现类似鸭大舌-短喙综合征症状,我们对送检病例进行了研究。本研究通过自然发病鸭的流行病学调查、临床症状、病理组织学检查、细菌培养、血涂片观察、血清生化指标检测、PCR检测、病毒分离增殖、病毒纯化、电镜负染、透射超薄切片观察、高通量测序和人工致病试验等方面进行研究。通过送检自然感染鸭的剖检观察肝脏边缘有灶状坏死,肺脏充血、肿胀鸭舌向外伸出,僵硬。血涂片观察发现血液中出现大量异嗜性粒细胞和淋巴细胞;病理组织学观察发现鸭舌、喙、肝脏以出现以淋巴细胞为主的炎性浸润,肝脏、心肌及胰腺发生坏死,肺脏和肾脏出血,其他组织出现不同病理变化;通过PCR检测鸭病毒性肝炎病毒、鸭坦布苏病毒、鸭呼肠孤病毒均呈阴性,鹅细小病毒(GPV)和鸭圆环病毒(DuCV)均呈双阳性;血清生化指标检测分析谷丙转氨酶、谷氨酰转肽酶、总胆红素、直接胆红素、总蛋白等生化指标于健康鸭比较差异显著或差异极显著;细菌学检测结果为阴性;通过PCR方法对GPV和DuCV的自然感染鸭的流行调查分析,发现自然感染鸭中GPV和DuCV的共感染比例高达40%。通过对病料的无菌分离,取病鸭的肝、舌组织,经尿囊腔按0.2ml接种量接种9d鸭胚后,15d收集鸭胚尿囊液。通过鸭胚胚胎的剖检观察到感染组鸭胚胚胎的胸肌、皮下及心脏弥漫性出血,肝脏坏死,对照组正常;病理组织学观察发现感染组的心肌细胞出现局部性或弥漫性出血,心肌细胞轻微空泡变性,肝脏的中央静脉周围出现弥漫性嗜酸性粒细胞浸润;正常对照组的肝脏和心脏未出现病变。通过PCR检测鸭胚尿囊液GPV和DuCV均呈双阳性。通过对鸭胚尿囊液中病毒经蔗糖梯度超速离心,纯化病毒。纯化后病毒经电镜负染观察到有的病毒粒子呈直径为20-22nm或14-20.5nm,六角形、球形或二十面体,无囊膜的完整病毒粒子。将纯化后病毒提取DNA,经全基因扩增,通过高通量测序证实病毒粒子为DuCV。通过核苷酸序列分析结果表明,该GPV毒株与与中国GPV型QH15毒株的亲缘关系最近,其同源性为99.8%,与其他毒株的同源性大部分在93.5%~99.8%。利用高通量测序手段获得DuCV的全基因,并命名为SDFC12毒株(GenBank:KY328304.1),DuCV的毒株的SDFC12株与中国DU103株的亲缘关系最近,其同源性为99.3%,与其他毒株的同源性在29.2%~99.3%。对感染鸭胚胚胎的肝脏透射电镜观察结果显示,肝脏内有大量的六角形或球形,直径为14-22nm的无囊膜完整病毒粒子存在。通过人工接种回归动物试验,剖检观察感染组的鸭舌略长且弯曲,肝脏坏死,胸腺出血,脾脏、法氏囊及胸腺比对照组重量减轻,免疫器官指数明显下降。实验动物的病理组织学观察及血涂片观察与临床自然感染鸭基本一致。实验动物的血清生化指标检测分析试验组的谷丙转氨酶、谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、总胆红素总蛋白等生化指标与对照组相比差异显著或差异极显著。通过PCR检测实验动物的GPV和DuCV均呈双阳性。通过本研究结果表明,鸭大舌-短喙综合征与GPV和DuCV共感染相关,经电镜负染观察到鹅细小病毒和鸭圆环病毒的病毒形态。经病理组织学检测、血清生化指标检测发现鸭大舌-短喙综合征引起鸭的肝脏的胆管上皮肿胀、硬化性胆管炎、肝硬化及肝坏死,引起鸭的胰腺炎。经高通量测序,验证鸭圆环病毒的存在,并获得其全基因序列。通过本研究,有助于鸭大舌-短喙综合征的致病机制研究,有助于防治鸭大舌-短喙综合征,有助于养鸭行业的健康发展。
文内图片：
图片说明：病鸭的剖检病变Fig.1NecropsylesionsoftheducksA、D：病鸭的鸭舌舌头向外伸出、僵硬、肿胀；B：肝脏边缘有灶状坏死；C：肺脏充血、肿胀A.D:Thetongueofthesickduckisstretchedout,stiffandswollen;B.Liveredgefocalnecrosis;C:Lungcongestion,
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.32

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本文编号：2511833