牛支原体08M株的致病性和免疫原性试验
发布时间：2019-07-29 12:07
【摘要】：为了评估牛支原体08M株作为牛支原体灭活疫苗候选株的可能性,攻毒组的每头犊牛气管注射10 mL 08M(1×109CCU/mL)新鲜菌液,对照组气管注射10 mL 0.15 mol/L pH 7.2的PBS。在不同时间采集鼻拭子用realtime PCR进行排菌检测,采集血清检测感染抗体,攻毒后第28天进行剖检,观察肺部病变并进行病原分离。同时,以牛支原体08M培养物为抗原,混合MONTANIDEISA 201 VG,分别制备抗原质量浓度为0.46和1.48 mg/mL两个剂量的免疫原,以每头牛2 mL的剂量,间隔28 d颈部皮下注射犊牛2次,同时设置阴性对照组和空白对照组,二免后第28天进行攻毒试验,方法同致病性试验,免疫后在不同时间采集血清,检测血清抗体。致病性试验结果显示,攻毒组动物在攻毒后第4~14天进行间歇性排菌,第7天可以检测到感染抗体,剖检后观察到攻毒组牛肺部发生明显的病变并从肺部病变组织中分离到牛支原体。免疫原性试验结果显示,2种质量浓度的免疫原免疫动物后均能产生较高水平的血清抗体,攻毒后所有动物均进行间歇性排菌,免疫组动物血清抗体水平无明显变化,对照组动物一免后第14天血清抗体达到最高水平,剖检后所有动物肺部均有病变且都能够分离出牛支原体。结果表明,牛支原体08M株具有较强的毒力和良好的免疫原性,本试验中用牛支原体08M株制备的灭活疫苗免疫犊牛后可以使牛体产生很好的免疫反应但却没有保护作用。
【图文】：
中国兽医科学第47卷ELISA效价/％ELISAtitres肺严重损伤，肺与胸腔粘连（见图2A），肺出血（见图2B），肺表面形成白色、单个分布的结节充斥着干酪样物质（见图2C），症状符合犊牛牛支原体肺炎症状，对照组动物肺部未见到病变（见图2D）。2.1.5病原分离分别取肺部组织进行病原分离，攻毒组的3头牛肺组织中均能分离出牛支原体，接种于改良Thiaucourt’s固体培养基出现牛支原体典型的纽扣状菌落（见图3）。用牛支原体特异性PCR进行检测，攻毒组的3头牛PCR检测结果均为阳性，对照组的2头牛均为阴性（见图4）。2.2免疫试验2.2.1抗原灭活检验抗原灭活前，用牛支原体特异性PCR方法可以检测到目的片段。抗原灭活后，连续3次进行传代培养未见牛支原体生长，利用牛支原体特异性PCR方法对培养物进行检测，结果为阴性（见图5），说明抗原已被完全灭活。2.2.2攻毒试验攻毒后，免疫组实验动物和对照组实验动物均未表现出明显的临床症状，排菌检测结果显示各组实验动物在攻毒后第4～14天进行间歇性排菌，剖检后各组实验动物肺部均有病变，且都能够分离出牛支原体。图1攻毒组和对照组攻毒前后的血清抗体水平Fig.1Theserumantibodylevelsofthechallengedgroupandthecontrolgroupbeforeandafterchallenge攻毒后时间/WWeekspost－challenge图3肺组织中分离出的牛支原体的菌落形态40×Fig.3ThecolonymorphologyofMycoplasmabovisisolatedfromlungtissue图4牛支原体的PCR扩增Fig.4PCRamplificationofMycoplasmabovisM：DNA分子质量标准；1～3：攻毒组的PCR扩增产物；4、5：对照组的PCR扩增产物；6：阳性对照M：DL10000DNAMarker；1—3：PCRproductsofthechallengegro；up4，5：PCRproductsofthecontrolgr
?ELISA效价/％ELISAtitres肺严重损伤，肺与胸腔粘连（见图2A），肺出血（见图2B），肺表面形成白色、单个分布的结节充斥着干酪样物质（见图2C），症状符合犊牛牛支原体肺炎症状，对照组动物肺部未见到病变（见图2D）。2.1.5病原分离分别取肺部组织进行病原分离，攻毒组的3头牛肺组织中均能分离出牛支原体，接种于改良Thiaucourt’s固体培养基出现牛支原体典型的纽扣状菌落（见图3）。用牛支原体特异性PCR进行检测，攻毒组的3头牛PCR检测结果均为阳性，对照组的2头牛均为阴性（见图4）。2.2免疫试验2.2.1抗原灭活检验抗原灭活前，用牛支原体特异性PCR方法可以检测到目的片段。抗原灭活后，连续3次进行传代培养未见牛支原体生长，利用牛支原体特异性PCR方法对培养物进行检测，结果为阴性（见图5），说明抗原已被完全灭活。2.2.2攻毒试验攻毒后，免疫组实验动物和对照组实验动物均未表现出明显的临床症状，排菌检测结果显示各组实验动物在攻毒后第4～14天进行间歇性排菌，剖检后各组实验动物肺部均有病变，且都能够分离出牛支原体。图1攻毒组和对照组攻毒前后的血清抗体水平Fig.1Theserumantibodylevelsofthechallengedgroupandthecontrolgroupbeforeandafterchallenge攻毒后时间/WWeekspost－challenge图3肺组织中分离出的牛支原体的菌落形态40×Fig.3ThecolonymorphologyofMycoplasmabovisisolatedfromlungtissue图4牛支原体的PCR扩增Fig.4PCRamplificationofMycoplasmabovisM：DNA分子质量标准；1～3：攻毒组的PCR扩增产物；4、5：对照组的PCR扩增产物；6：阳性对照M：DL10000DNAMarker；1—3：PCRproductsofthechallengegro；up4，5：PCRproductsofthecontrolgro；u6p：Positivec
【作者单位】： 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;
【基金】：国家科技支撑计划项目(2015BAD12B02) 国家自然科学基金资助项目(31402223,31602088) 国家重点研发计划项目(2016YFD0500907) 甘肃省科技支撑计划项目(1204NKCA071) 兰州市城关区科技计划项目(2012-2-1) 国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-38)
【分类号】：S852.62
【图文】：
中国兽医科学第47卷ELISA效价/％ELISAtitres肺严重损伤，肺与胸腔粘连（见图2A），肺出血（见图2B），肺表面形成白色、单个分布的结节充斥着干酪样物质（见图2C），症状符合犊牛牛支原体肺炎症状，对照组动物肺部未见到病变（见图2D）。2.1.5病原分离分别取肺部组织进行病原分离，攻毒组的3头牛肺组织中均能分离出牛支原体，接种于改良Thiaucourt’s固体培养基出现牛支原体典型的纽扣状菌落（见图3）。用牛支原体特异性PCR进行检测，攻毒组的3头牛PCR检测结果均为阳性，对照组的2头牛均为阴性（见图4）。2.2免疫试验2.2.1抗原灭活检验抗原灭活前，用牛支原体特异性PCR方法可以检测到目的片段。抗原灭活后，连续3次进行传代培养未见牛支原体生长，利用牛支原体特异性PCR方法对培养物进行检测，结果为阴性（见图5），说明抗原已被完全灭活。2.2.2攻毒试验攻毒后，免疫组实验动物和对照组实验动物均未表现出明显的临床症状，排菌检测结果显示各组实验动物在攻毒后第4～14天进行间歇性排菌，剖检后各组实验动物肺部均有病变，且都能够分离出牛支原体。图1攻毒组和对照组攻毒前后的血清抗体水平Fig.1Theserumantibodylevelsofthechallengedgroupandthecontrolgroupbeforeandafterchallenge攻毒后时间/WWeekspost－challenge图3肺组织中分离出的牛支原体的菌落形态40×Fig.3ThecolonymorphologyofMycoplasmabovisisolatedfromlungtissue图4牛支原体的PCR扩增Fig.4PCRamplificationofMycoplasmabovisM：DNA分子质量标准；1～3：攻毒组的PCR扩增产物；4、5：对照组的PCR扩增产物；6：阳性对照M：DL10000DNAMarker；1—3：PCRproductsofthechallengegro；up4，5：PCRproductsofthecontrolgr
?ELISA效价/％ELISAtitres肺严重损伤，肺与胸腔粘连（见图2A），肺出血（见图2B），肺表面形成白色、单个分布的结节充斥着干酪样物质（见图2C），症状符合犊牛牛支原体肺炎症状，对照组动物肺部未见到病变（见图2D）。2.1.5病原分离分别取肺部组织进行病原分离，攻毒组的3头牛肺组织中均能分离出牛支原体，接种于改良Thiaucourt’s固体培养基出现牛支原体典型的纽扣状菌落（见图3）。用牛支原体特异性PCR进行检测，攻毒组的3头牛PCR检测结果均为阳性，对照组的2头牛均为阴性（见图4）。2.2免疫试验2.2.1抗原灭活检验抗原灭活前，用牛支原体特异性PCR方法可以检测到目的片段。抗原灭活后，连续3次进行传代培养未见牛支原体生长，利用牛支原体特异性PCR方法对培养物进行检测，结果为阴性（见图5），说明抗原已被完全灭活。2.2.2攻毒试验攻毒后，免疫组实验动物和对照组实验动物均未表现出明显的临床症状，排菌检测结果显示各组实验动物在攻毒后第4～14天进行间歇性排菌，剖检后各组实验动物肺部均有病变，且都能够分离出牛支原体。图1攻毒组和对照组攻毒前后的血清抗体水平Fig.1Theserumantibodylevelsofthechallengedgroupandthecontrolgroupbeforeandafterchallenge攻毒后时间/WWeekspost－challenge图3肺组织中分离出的牛支原体的菌落形态40×Fig.3ThecolonymorphologyofMycoplasmabovisisolatedfromlungtissue图4牛支原体的PCR扩增Fig.4PCRamplificationofMycoplasmabovisM：DNA分子质量标准；1～3：攻毒组的PCR扩增产物；4、5：对照组的PCR扩增产物；6：阳性对照M：DL10000DNAMarker；1—3：PCRproductsofthechallengegro；up4，5：PCRproductsofthecontrolgro；u6p：Positivec
【作者单位】： 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;
【基金】：国家科技支撑计划项目(2015BAD12B02) 国家自然科学基金资助项目(31402223,31602088) 国家重点研发计划项目(2016YFD0500907) 甘肃省科技支撑计划项目(1204NKCA071) 兰州市城关区科技计划项目(2012-2-1) 国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-38)
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1 刘R，
本文编号：2520495
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