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玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响

发布时间:2019-07-31 16:27
【摘要】:以原代培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,设立玉米赤霉烯酮(ZEA)对照组(0.0 mg/L)及高(80.0 mg/L)、中(20.0,40.0mg/L)、低(0.2,2.0mg/L)剂量组,比较不同质量浓度ZEA对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响。形态学观察发现,随着ZEA质量浓度的增加,颗粒细胞呈散在生长,体积缩小变圆,数量减少;高剂量组(80.0mg/L)中,76.96%细胞均已脱壁死亡。MTT法表明,ZEA对卵巢颗粒细胞具有生长抑制作用;免疫荧光结果显示随ZEA质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高,高质量浓度组细胞增殖率仅为1.01%;Western blot检测结果显示经ZEA处理,Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表达量均明显上调,且存在质量浓度-效应关系。结果表明,ZEA能诱导卵巢颗粒细胞凋亡,并显著上调Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表达,可通过死亡受体通路介导卵巢颗粒细胞发生凋亡。
【图文】:

玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响


积宽大、排列紧密、细胞透亮、胞浆饱满(图1A)。而在ZEA处理组,随着ZEA质量浓度的增加,颗粒细胞呈散在生长、细胞突起变短减少、胞质内出现较多颗粒和空泡。贴壁细胞的数量逐渐减少,细胞体积明显缩小呈圆形,且高剂量F组(80.0mg/L)绝大多数细胞都已脱壁死亡(图1F)。图1不同质量浓度ZEA处理猪卵巢颗粒细胞的形态学变化(200×)A.0.0mg/L;B.0.2mg/L;C.2.0mg/L;D.20.0mg/L;E.40.0mg/L;F.80.0mg/L2.2ZEA对猪卵巢颗粒细胞的生长抑制作用ZEA对卵巢颗粒细胞有较强的生长抑制作用。处理组之间相互比较,随着ZEA质量浓度的增加,抑制作用逐渐增强,且细胞抑制率与ZEA质量浓度呈正相关(R2=0.9984)。当质量浓度为40.0mg/L时,抑制率为46.88%,接近半数抑制浓度(IC50);而当质量浓度为80.0mg/L,抑制率为76.96%,大部分细胞死亡;表明ZEA对颗粒细胞具有很强的细胞毒性。Excel数据分析结果显示,质量浓度与抑制率呈二阶多项式:y=3.8155x2-11.511x+8.6130,拟合优度R2=0.9984,经f检验P=4.92E-06,水平上显著(表1、图2)。表1不同质量浓度ZEA对猪卵巢颗粒细胞生长抑制作用处理组ZEA/(mg·L-1)D570值细胞抑制率/%A0.00.64±0.040.00B0.20.61±0.043.01±1.06C2.00

玉米赤霉烯酮对体外培养猪卵巢颗粒细胞的影响


984,经f检验P=4.92E-06,水平上显著(表1、图2)。表1不同质量浓度ZEA对猪卵巢颗粒细胞生长抑制作用处理组ZEA/(mg·L-1)D570值细胞抑制率/%A0.00.64±0.040.00B0.20.61±0.043.01±1.06C2.00.58±0.037.40±1.20D20.00.48±0.0322.91±1.30E40.00.33±0.0446.88±3.34F80.00.14±0.0176.96±2.52图2不同质量浓度ZEA作用于猪卵巢颗粒细胞的抑制率3.3ZEA对猪卵巢颗粒细胞增殖的影响在荧光显微镜下,Brdu阳性染色呈绿色,Hochest33342染色呈蓝色。各组随机选取5个视野,进行拍照,,统计分析(图3)。结果显示,未处理过的细胞增殖率为16.49%。随着ZEA质量浓度的增加,增殖率逐渐下降;B组(0.2mg/L)增殖率下降没有明显的差异(表2);C、D、E、F组阳性细胞比例明显减少,增殖率均有不同程度的下降。质量浓度与抑制率符合四阶方程:y=0.0092x4+0.0389x3-1.4150x2+2.7496x+15.140,R2=0.9984,观测值与方程拟合度高(图4)。299中国兽医学报2017年2月第37卷第2期ChinJVetSciFeb.2017Vol.37No.2
【作者单位】: 西北农林科技大学动物医学院;杨凌联合营养生物科技有限公司;
【基金】:陕西省科技型中小企业技术创新资金资助项目(2014CXZJ49) 陕西杨凌示范区科技计划资助项目(2014NY-38)
【分类号】:S859.87

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10 杨s

本文编号:2521441


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