广西部分家养反刍动物EHD血清学及传播媒介的调查与病原分离鉴定

发布时间：2019-08-19 14:03

【摘要】：鹿流行性出血热(epizootic hemorrhagic disease,EHD)是由呼肠孤病毒科环状病毒属鹿流行性出血热病毒(EHDV)引起的一种虫媒病毒病。广泛分布于热带和温带地区。本研究采用针对EHDV群特异性抗原VP7蛋白设计的竞争ELISA (C-ELISA)抗体检测试剂盒在广西境内开展牛、羊反刍动物EHDV血清学调查。通过对广西8个县区217份山羊血清,313份黄牛血清进行检测,结果发现广西境内家养反刍动物普遍存在EHDV感染,总阳性率达到36.2%(192/530),其中,黄牛的血清阳性率高达55%(172/313),明显高于山羊(9.2%；20/217)。广西家养反刍动物EHDV感染具有地域差异和海拔高度的差异,表现为桂南地区明显高于桂北地区；平原地区丘陵地区山地地区。为了解广西地区EHDV传播媒介库蠓的种类及优势群体,在血清学调查的基础上选择低海拔、高湿度、适宜媒介昆虫繁殖、EHDV血清学阳性率高且牛羊密集的广西马山县设立牛羊虫媒病监控点,在蚊虫活跃的八月底连续三天捕获媒介库蠓进行形态学及分子生物学鉴定。结果在所鉴定的326只库蠓中,以边缘库蠓(33.1%)和尖喙库蠓(27.3%)为优势库蠓。通过在监控点筛选EHDV抗体阴性的10头牛和5只山羊作为哨兵动物,分别混养在EHDV抗体阳性的牛群及羊群中,采用白天放牧,夜间赶回栏舍的方式饲养。1-4月每月采血一次,5-12月每周采血一次,采用C-ELISA试剂盒监测其抗体转阳情况,取哨兵动物EHDV抗体转阳时间点及前、后两周的肝素钠抗凝血红细胞,采用直接接种BHK-21细胞及先在C6/36细胞传一代后再接BHK-21细胞两种方法同时分离EHDV。以RT-PCR、病毒中和试验等对分离株进行鉴定,结果在3头哨兵牛抗体转阳时间前后共8份血样中分离到3株病毒,TCID50分别为10-25/0.1mL,10-2.83/0.1mL,10-2.5/0.1 mL,经血清型鉴定均为EHDV-5型。这是首次在广西牛群中分离到EHDV,说明广西反刍动物存在EHDV感染。
【图文】：

全球,奥肯,不列颠哥伦比亚省,堪萨斯州

２．１邋ＥＨＤＶ在北美逡逑加拿大除不列颠哥伦比亚省的奥肯那根山谷有散在发生外，并无大范围爆发ｔ２年美国亚利桑那州黑尾鹿、}B羊及２００８年德克萨斯州的哨兵牛上发现ＥＨＤＶＤＶ－２（Ａ化ｅｒｔａ邋ｓｔｒａｉｎ）中和抗体Ｗ。２００８年美国德克萨斯州、堪萨斯州白尾鹿血清ｓ－９

序列,系统进化树,病毒,同源性

段２的主要特征，，纳入研究的１１个病毒只有＞４５．８％的核巧酸序列同源性。该节段在不同逡逑的血清型么间无特定的保守或变异区域ＶＰ２决定病毒血清型的特异性。逡逑ＥＨＤＶ节段２／ＶＰ２序列的系统发育分析表现为四个不同集群（Ａ－Ｄ）（图１－５）。与核逡逑也蛋白不同，它们不反映东／西部病毒分组Ｐ７３，而是表现出病毒血清学相关特性。逡逑ＥＨＤＶ－２和７为Ａ组（图＾５）。ＪＡＰ１９５９／０１邋（２型）和ＡＵＳ１９８１／０６邋（７型）之间序列同逡逑源性为７０．４％ＮＴ邋（６８．５％ＡＡ）。逡逑ＥＨＤＶ－６和８为Ｂ组。病毒ＡＵＳ１９８１／０７邋（６型）和ＡＵＳ１９８２／０６邋（８型）之间同源性为的．０逡逑％ＮＴ邋（７１．１％ＡＡ）。ＢＡＲ１９８３／０１迄今为止仍未分类，很可能ＢＡＲ１９８３／０１属于血清型６。逡逑ＡＵＳ１Ｗ１／０７邋（６型）和ＢＡＲ１９８３／０１邋（未分类）之间同源性为７２．６％ＮＴ邋（７６．７％ＡＡ），逡逑ＡＵＳ１９８２／０６邋（８型）和ＢＡＲ１９８３／０１邋之间同源性为７０．５％ＮＴ邋（７２．３％ＡＡ）。因此很可能逡逑ＢＡＲ１９８３／０１属于血清６型。逡逑ＥＨＤＶ－１邋和３为Ｃ组。包括病毒ＵＳＡ１Ｗ５／０１邋（１邋型）和ＮＩＧ１Ｗ７／０１邋（３型）（图＾５）。逡逑两种病毒节段２同源性非常高，在８８．７％ＮＴ邋（９３．０％ＡＡ）。这些毒株很可能实际上属于同逡逑一血清型。逡逑ＥＨＤＶ－４和５为Ｄ组。包括病毒分离株ＮＩＧ１９６８／０１邋（４型）和ＡＵＳ１９７７／０１邋（５型）（图逡逑１－５）。这两种病毒节段２同源性为６５．５％ＮＴ邋（６３．２％ＡＡ）。表明血清型４和５在同一个组中逡逑同源性最低
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S855.3

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