脐带间充质干细胞对乳腺上皮细胞乳蛋白合成的调控研究
发布时间：2019-08-20 15:49
【摘要】：为探究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)调控乳腺上皮细胞(BMECs)乳蛋白合成的可能作用机制,实验共分为8组,实验组利用Transwell小室双层共培养UC-MSCs和BMECs,BMECs单培养为对照组,每组又分为不处理组和IGF-ΙR抑制剂AG1024、PI3K抑制剂LY294002不同处理组,ELISA检测上清IGF-Ι和β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)含量,实时荧光定量PCR测定CSN2、CSN3、P13K、AKT、m TOR m RNA表达。结果表明:实验组各项指标均极显著高于对照组(P0.01);AG1024处理显著下调各基因表达(P0.05),极显著降低CSN2、CSN3蛋白含量(P0.01);LY294002处理极显著抑制PI3K m RNA表达(P0.01),显著降低CSN2、CSN3 m RNA表达和蛋白含量;AG1024和LY294002共同处理极显著下调P13K、AKT、m TOR m RNA表达(P0.01),显著下调CSN2、CSN3 m RNA表达(P0.05),极显著降低CSN2、CSN3蛋白含量(P0.01)。综上,UC-MSCs能够通过IGF-Ι介导PI3K/Akt/m TOR信号通路,上调BMECs主要乳蛋白基因表达,促进乳蛋白合成。
【图文】：
-57-2017年第53卷第5期ScienceandTechnology·科学技术MSCs+AG组极显著高于BMECs+AG组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+LY组极显著高于BMECs+LY组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组显著高于BMECs+AG+LY组（P<0.05）（图2）。2.2RT-qPCR鉴定结果表2数据显示，各样本RNA浓度均在200～400ng/μL，OD260/280均在1.8～2.2，表明总RNA纯度较高，并且有足量的RNA用于后续实验；各基因RT-qPCR扩增图谱显示（图3），Ct值是反映体系中荧光信号达到阀值时经历的循环数，熔解曲线显示（图3），基线平稳，表明PCR产物单一，能准确定量目的基因mRNA的表达量。2.3AG1024和LY294002对乳蛋白合成和信号通路关键基因表达的影响定量结果显示，实验组PI3K、AKT、mTORmRNA表达丰度均极显著高于对照组（P<0.01），AG1024和LY294002处理组均极显著下调各项基因表达丰度（P<0.01）（图4）；各组细胞中CSN2、CSN3mRNA的表达，实验组最高，显著高于对照组（P<0.05），AG1024和LY294002单独处理组均显著低于处理前（P<0.05），BMECs+AG+LY组较对照组相比极显著下调（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组较实验组相比显著下调（P<0.05），不同处理方案的实验组均显著高于同处理的对照组（P<0.05）（图5）。3讨论前期实验已证实，UC-MSCs、BMECs均可分泌IGF-Ι，无血清共培养条件下，，UC-MSCs能够显著提高BMECs中IGF-Ι、IGF-ΙRmRNA表达。研究结果表明，UC-MSCs可分泌IGF-I等多度（浓ngml/）Cncoetnratino（ngml/）BaCBbABMECsBMECs/UC-MSCsBMECs+AGBMECs/UCMSCs+AG30.00025.00020.00015.00010.0005.0000.000度浓ng/m,L柱形图字母相同表示差异不显著（P>0.05），不同小写字母间表
-57-2017年第53卷第5期ScienceandTechnology·科学技术MSCs+AG组极显著高于BMECs+AG组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+LY组极显著高于BMECs+LY组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组显著高于BMECs+AG+LY组（P<0.05）（图2）。2.2RT-qPCR鉴定结果表2数据显示，各样本RNA浓度均在200～400ng/μL，OD260/280均在1.8～2.2，表明总RNA纯度较高，并且有足量的RNA用于后续实验；各基因RT-qPCR扩增图谱显示（图3），Ct值是反映体系中荧光信号达到阀值时经历的循环数，熔解曲线显示（图3），基线平稳，表明PCR产物单一，能准确定量目的基因mRNA的表达量。2.3AG1024和LY294002对乳蛋白合成和信号通路关键基因表达的影响定量结果显示，实验组PI3K、AKT、mTORmRNA表达丰度均极显著高于对照组（P<0.01），AG1024和LY294002处理组均极显著下调各项基因表达丰度（P<0.01）（图4）；各组细胞中CSN2、CSN3mRNA的表达，实验组最高，显著高于对照组（P<0.05），AG1024和LY294002单独处理组均显著低于处理前（P<0.05），BMECs+AG+LY组较对照组相比极显著下调（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组较实验组相比显著下调（P<0.05），不同处理方案的实验组均显著高于同处理的对照组（P<0.05）（图5）。3讨论前期实验已证实，UC-MSCs、BMECs均可分泌IGF-Ι，无血清共培养条件下，UC-MSCs能够显著提高BMECs中IGF-Ι、IGF-ΙRmRNA表达。研究结果表明，UC-MSCs可分泌IGF-I等多度（浓ngml/）Cncoetnratino（ngml/）BaCBbABMECsBMECs/UC-MSCsBMECs+AGBMECs/UCMSCs+AG30.00025.00020.00015.00010.0005.0000.000度浓ng/m,L柱形图字母相同表示差异不显著（P>0.05），不同小写字母间表
【作者单位】： 新疆农业大学动物科学学院新疆肉乳用草食动物营养实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31560645) 自治区科技人才培养项目(GN2015YX014) 中国博士后基金委 2015年度新疆研究生科研创新项目(XJGRI2015083)
【分类号】：S852.2
【图文】：
-57-2017年第53卷第5期ScienceandTechnology·科学技术MSCs+AG组极显著高于BMECs+AG组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+LY组极显著高于BMECs+LY组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组显著高于BMECs+AG+LY组（P<0.05）（图2）。2.2RT-qPCR鉴定结果表2数据显示，各样本RNA浓度均在200～400ng/μL，OD260/280均在1.8～2.2，表明总RNA纯度较高，并且有足量的RNA用于后续实验；各基因RT-qPCR扩增图谱显示（图3），Ct值是反映体系中荧光信号达到阀值时经历的循环数，熔解曲线显示（图3），基线平稳，表明PCR产物单一，能准确定量目的基因mRNA的表达量。2.3AG1024和LY294002对乳蛋白合成和信号通路关键基因表达的影响定量结果显示，实验组PI3K、AKT、mTORmRNA表达丰度均极显著高于对照组（P<0.01），AG1024和LY294002处理组均极显著下调各项基因表达丰度（P<0.01）（图4）；各组细胞中CSN2、CSN3mRNA的表达，实验组最高，显著高于对照组（P<0.05），AG1024和LY294002单独处理组均显著低于处理前（P<0.05），BMECs+AG+LY组较对照组相比极显著下调（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组较实验组相比显著下调（P<0.05），不同处理方案的实验组均显著高于同处理的对照组（P<0.05）（图5）。3讨论前期实验已证实，UC-MSCs、BMECs均可分泌IGF-Ι，无血清共培养条件下，，UC-MSCs能够显著提高BMECs中IGF-Ι、IGF-ΙRmRNA表达。研究结果表明，UC-MSCs可分泌IGF-I等多度（浓ngml/）Cncoetnratino（ngml/）BaCBbABMECsBMECs/UC-MSCsBMECs+AGBMECs/UCMSCs+AG30.00025.00020.00015.00010.0005.0000.000度浓ng/m,L柱形图字母相同表示差异不显著（P>0.05），不同小写字母间表
-57-2017年第53卷第5期ScienceandTechnology·科学技术MSCs+AG组极显著高于BMECs+AG组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+LY组极显著高于BMECs+LY组（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组显著高于BMECs+AG+LY组（P<0.05）（图2）。2.2RT-qPCR鉴定结果表2数据显示，各样本RNA浓度均在200～400ng/μL，OD260/280均在1.8～2.2，表明总RNA纯度较高，并且有足量的RNA用于后续实验；各基因RT-qPCR扩增图谱显示（图3），Ct值是反映体系中荧光信号达到阀值时经历的循环数，熔解曲线显示（图3），基线平稳，表明PCR产物单一，能准确定量目的基因mRNA的表达量。2.3AG1024和LY294002对乳蛋白合成和信号通路关键基因表达的影响定量结果显示，实验组PI3K、AKT、mTORmRNA表达丰度均极显著高于对照组（P<0.01），AG1024和LY294002处理组均极显著下调各项基因表达丰度（P<0.01）（图4）；各组细胞中CSN2、CSN3mRNA的表达，实验组最高，显著高于对照组（P<0.05），AG1024和LY294002单独处理组均显著低于处理前（P<0.05），BMECs+AG+LY组较对照组相比极显著下调（P<0.01），BMECs/UC-MSCs+AG+LY组较实验组相比显著下调（P<0.05），不同处理方案的实验组均显著高于同处理的对照组（P<0.05）（图5）。3讨论前期实验已证实，UC-MSCs、BMECs均可分泌IGF-Ι，无血清共培养条件下，UC-MSCs能够显著提高BMECs中IGF-Ι、IGF-ΙRmRNA表达。研究结果表明，UC-MSCs可分泌IGF-I等多度（浓ngml/）Cncoetnratino（ngml/）BaCBbABMECsBMECs/UC-MSCsBMECs+AGBMECs/UCMSCs+AG30.00025.00020.00015.00010.0005.0000.000度浓ng/m,L柱形图字母相同表示差异不显著（P>0.05），不同小写字母间表
【作者单位】： 新疆农业大学动物科学学院新疆肉乳用草食动物营养实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31560645) 自治区科技人才培养项目(GN2015YX014) 中国博士后基金委 2015年度新疆研究生科研创新项目(XJGRI2015083)
【分类号】：S852.2
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本文编号：2528735
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