产肠毒素大肠杆菌菌影疫苗的制备及其免疫效果的评价

发布时间：2019-08-28 21:24

【摘要】：犊牛腹泻是指犊牛在出生7h到12d内所发生的一种急性腹泻,一般由肠道内细菌、病毒、寄生虫等传染性因素或者营养不良、饲养环境恶劣等非传染性因素造成,严重时会引发脱水,造成犊牛大量死亡。犊牛腹泻是全球奶牛、肉牛养殖过程中最常见的问题,往往带来巨大的经济损失,严重制约着养牛行业的发展。在各种导致犊牛腹泻的因素中,产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是最主要的病原菌,也是牛发生肠毒血症的病原菌之一。目前,多通过接种疫苗来预防此疾病的发生。然而,由于大肠杆菌血清型繁多,且不同区域流行情况不同,一些商品化疫苗往往不能得到很好的免疫效果,因此,新疫苗的研发一直是预防该病的重点。菌影是近年来的一种新型疫苗。它是通过基因灭活的方式将细菌变成一种无胞质内容物,但保留完整的细菌菌体及外膜上各种抗原结构的无活性空胞体。由于菌影疫苗的免疫原性高,制备简单,保存运输方便,同时还具有免疫佐剂性质,能够增强免疫应答等诸多优点,使其成为国内外研究人员的研究热点。本研究以黑龙江部分牧场死亡腹泻犊牛的病料为研究材料,从中分离出致病性大肠杆菌,并对其所携带的毒力因子进行检测,并对致病性大肠杆菌进行分型。结果显示,该地区致犊牛腹泻的主要大肠杆菌病原型为产肠毒素大肠杆菌。在此基础上,我们筛选出一株疫苗候选菌株,制备成产肠毒素大肠杆菌菌影疫苗。通过动物试验对产肠毒素大肠杆菌菌影疫苗的免疫效果进行检测。将30只小鼠随机分为三组,每组10只:菌影疫苗组、灭活疫苗组和对照组。疫苗的接种方式为腹腔注射,免疫剂量为1×108 CFU,每两周免疫一次,共免疫三次。每次免疫一周后采取血清,利用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清抗体水平。疫苗三免一周后对免疫小鼠进行腹腔攻毒,观察并记录攻毒一周内小鼠的死亡情况。通过疫苗对小鼠的保护率以及小鼠抗体水平的检测评价疫苗的免疫效果。结果表明,菌影疫苗对感染小鼠有较高的保护率,且能够诱导产生较高的抗体水平。综合本研究结果表明,产肠毒素大肠杆菌菌影疫苗具有良好的安全性,并具有很好的免疫原性,可激发动物体产生较好的免疫应答,可作为预防产肠毒素大肠杆菌导致的犊牛腹泻的新型候选疫苗。本研究为产肠毒素大肠杆菌疫苗的制备提供了基础。
【图文】：

序列,大肠杆菌,PCR鉴定,鉴别培养基

验结果肠杆菌的鉴定结果规鉴别培养基分离培养方法分离得到的 63 株疑似大肠杆菌进行 PCR 扩增鉴定期大小相符的片段，约 947 bp（图 3-1）。将 PCR 扩增产物送至吉林库美生物科序，，测序结果与 GenBank 上的序列进行 BLAST 比对分析，同源性达 99%以上株为大肠杆菌。

PCR鉴定,鉴定结果,产物

DL2000 DNA Marker；1-6：K88 基因的 PCR 产物L2000 DNA Marker; 1-6: PCR product of K88 gene图 3-2 K88 基因的 PCR 鉴定结果Fig.3-2 Identification of K88 gene by PCRDL2000 DNA Marker；1-3：K99 基因的 PCR 产物L2000 DNA Marker; 1-3: PCR product of K99 gene图 3-3 K99 基因的 PCR 鉴定结果Fig.3-3 Identification of K99 gene by PCR
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.4

【参考文献】