羊布鲁菌快速检测技术应用研究

发布时间：2019-09-09 15:15

【摘要】：通过用4种方法对羊布鲁菌的检测,确立适用于基层应用的羊布鲁菌快速检测技术。http://www.mdxycn.com/采用浊度仪LAMP、金属浴LAMP、荧光目视检测试剂盒LAMP和普通PCR共4种方法对羊血液中的布鲁菌进行检测,比较其检测结果。结果表明,共检测162份羊血液,布鲁菌检出率分别为浊度仪LAMP为8.6%、金属浴LAMP为8.6%、荧光目视检测试剂盒为8.6%、普通PCR为6.2%。LAMP较普通PCR方法特异性强且灵敏度高;金属浴LAMP方法操作简便,无需特殊设备,更适用于基层应用。
【图文】：

柱状图,金属浴,阳性对照,柱状图

分别为布鲁菌活疫苗（Ｍ５株）ＤＮＡ（阳性对照）、双蒸水（阴性对照）及待检样品ＤＮＡ。２结果２．１布鲁菌Ｏｍｐ２５基因的金属浴ＬＡＭＰ扩增结果经６３℃５０ｍｉｎ，９０℃１０ｍｉｎ扩增后，阳性对照管１号和待检样品管３号出现白色浑浊，经６０００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｍ离心后沉淀明显，结果说明布鲁菌核酸在扩增过程中产生大量焦磷酸镁白色浑浊，离心后白色沉淀明显。而阴性对照管２号和待检样品管４号未发生变化说明没有扩增出布鲁菌核酸。具体结果见图１。用该方法检测羊血液１６２份，检出布鲁菌１４份，布鲁菌检出率为８．６％。Ａ．离心前；Ｂ离心后；１．阳性对照；２．阴性对照；３、４．待检样品Ａ．Ｂｅｆｏｒｅｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ；Ｂ．Ａｆｔｅｒｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ；１．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ图１布鲁菌Ｏｍｐ２５基因的金属浴ＬＡＭＰ扩增结果Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙＬＡＭＰｍｅｔａｌｂａｔｈ２．２布鲁菌Ｏｍｐ２５基因的实时浊度仪ＬＡＭＰ扩增结果经６３℃４５ｍｉｎ，８０℃１０ｍｉｎ在ＬＡＭＰ实时浊度仪扩增后，２号通道出现蓝色柱状图且柱状图底部为红色，说明２号阳性对照管扩增出布鲁菌核酸。其他通道未出现蓝色柱状图且柱状图底部为绿色，说明阴性对照管未扩增出布鲁菌核酸（图２）。待检样品管３号所对应的３号通道出现蓝色柱状图且柱状图底部为红色，说

浊度仪,阳性对照,基因,样品

；２．Ｂｒｕｃｅｌｌａ（Ｍ５）ＤＮＡ；３．Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ；４．Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＤＮＡ；５．ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＤＮＡ图２布鲁菌Ｏｍｐ２５基因的实时浊度仪ＬＡＭＰ扩增结果Ｆｉｇ．２ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＬＡＭＰ１．阳性对照；２．阴性对照；３、４．待检样品１．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ图３布鲁菌Ｏｍｐ２５基因实时浊度仪ＬＡＭＰ扩增结果Ｆｉｇ．３ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＬＡＭＰＡ．可见光；Ｂ．紫外灯；１．阳性对照；２．阴性对照；３、４．待检样品Ａ．Ｖｉｓｉｂｌｅｌｉｇｈｔ；Ｂ．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ；１．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ图４荧光目视检测试剂盒检测布鲁菌Ｏｍｐ２５基因ＬＡＭＰ扩增结果Ｆｉｇ．４ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔ２．４布鲁菌ＩＳ７１１基因的ＰＣＲ扩增结果分析电泳结果可得布鲁菌病疫苗（Ｍ５株）阳性ＤＮＡ（２号泳道）及待检样品（４号泳道）在８００ｂｐ和１８０ｂｐ有条带，，说明扩增出布鲁菌核酸。阴性样品（３号泳道）及待检样品（５号泳道）只在８００ｂｐ有条带，说明未扩增出布鲁菌
【作者单位】：新疆农业大学动物医学学院;伊犁出入境检验检疫局;
【基金】：新疆农业大学研究生产学研项目(xjaucxy-yjs-20151014) 国家级大学生创新项目(201610758015)
【分类号】：S858.26

【参考文献】