苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

发布时间：2019-09-23 19:59

【摘要】：许多植物多糖已被证实具有调节人或动物免疫应答的生物活性,研究表明苹果多糖(Malus pumila polysaccharide)是由许多相同或不同单糖连接而成的多聚物化合物,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎、减缓疲劳等多方面生物活性,但目前关于苹果多糖对免疫应答调节作用的研究较少。本研究采用MTT比色法检测不同浓度苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞活力的影响;应用Agilent SurePrint G3 Mouse GE V2.0(8*60K,Design ID:074809)基因表达谱芯片研究苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞基因表达谱的影响;应用实时荧光定量PCR对8个基因表达谱芯片分析筛选出的差异基因进行了定量分析;采用Western Blot技术研究了苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞iNOS,p105等蛋白表达的影响;同时应用微量法NO检测试剂盒测定了苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞NO产生的影响。以期探究苹果多糖对机体免疫功能的调节作用,实验结果如下:1.苹果多糖溶液浓度在20-80μg/m L时,对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖起到促进作用,而当苹果多糖溶液浓度高于或等于160μg/m L时,对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖产生抑制作用;2.基因表达谱芯片扫描数据结果经分析后筛选出1597个差异基因(Fold Change2,p0.05),Go分析表明苹果多糖可能通过影响RAW264.7小鼠巨噬细胞内广泛分布的靶位点,从而影响巨噬细胞的炎症反应、天然免疫应答以及影响巨噬细胞参与特异性免疫应答和病毒防御过程;3.KEGG Pathway分析结果表明,苹果多糖能通过RAW264.7小鼠巨噬细胞表面相关受体影响TNF信号转导通路及NF-κB信号转导通路,从而激活巨噬细胞的免疫应答功能,促进参与免疫应答、炎症反应的细胞因子或趋化因子的mRNA转录水平上调,从而发挥其对巨噬细胞的调节作用。实时荧光定量PCR对8个与TNF、NF-κB信号转导通路相关基因相对表达量分析结果与基因表达谱芯片结果全部吻合,证明了基因表达谱芯片检测结果的准确程度和可靠性;4.Western Blot实验结果表明,苹果多糖能显著提高RAW264.7小鼠巨噬细胞iNOS的表达。通过检测不同浓度苹果多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞NO产生的影响,证实了苹果多糖通过上调iNOS表达促进巨噬细胞产生NO的活性。综上所述,本研究证实了苹果多糖可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞增殖,通过激活NF-κB信号转导通路及TNF信号转导通路影响RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性,促进RAW264.7小鼠巨噬细胞iNOS蛋白表达并提高RAW264.7小鼠巨噬细胞NO的产量。
【图文】：

论天然多糖已经被证实能够促进巨噬细胞增殖，例如沙葱多糖、黄芪多糖等。同关于天然多糖抑制肿瘤细胞增殖的报道。本研究选取 5 个不同浓度苹果多糖作264.7 小鼠巨噬细胞，4h 后使用 MTT 法检测细胞活力。最终结果显示，与未经处理的正常对照组细胞相比，20-80μg/mL 苹果多糖溶液处理过的细胞其活力p＜0.05）；苹果多糖溶液浓度为 120μg/mL 时，其对细胞活力没有显著的影响（苹果多糖浓度为 160μg/mL 时，细胞活力显著降低（p＜0.05）。因此，苹果多图 2-1.不同浓度苹果多糖对 RAW264.7 小鼠巨噬细胞增殖的影响与正常对照组相比差异显著（p＜0.05）；**代表与正常对照组相比差异极显著（p＜0.01）1 The influences of malus pumila polysaccharide on multiplication capacity of RAW264.7 murinemacrophage* P < 0.05, ** P < 0.01 versus control group

2.3 差异基因筛选结果对标准化的数据利用 T 检验的 p 值和倍数变化值进行差异基因筛选，总计筛选到 15个差异基因（Fold change＞3 的差异基因见附录），其中上调基因 862 个，下调基因 个。如图 3-2，灰色点为 P＞0.05 的基因，为无显著差异基因；绿色点为 fold change 绝值＜2，P≤0.05 的基因，为差异倍数小于 2 的基因；红色点为 Fold change≥2，P≤0.05 基因，为显著上调差异基因；蓝色点为 Fold change≤-2，P≤0.05 的基因，为显著性下调异基因。其中差异表达倍数最高的 10 个基因见表 3-2。图 3-1 基因表达谱芯片杂交扫描图a1：实验组 1；a2：实验组 2；a3：实验组 3；b1：对照组 1；b2：对照组 2；b3：对照组 3Fig3-1 The scanning chart of expression profile microarraya1：test group 1；b1：test group 2；a3：test group 3；b1：control group 1；b2：control group 2；b3：control group 3
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S853.7

【相似文献】

相关期刊论文 前6条

1 张淼涛,马新武,王秋芳,高海鹏;中草药组方对小鼠巨噬细胞吞噬力的影响[J];动物医学进展;2000年04期

2 周静;赵小霞;马吉春;方芳;宋献美;柳忠辉;台桂香;;强力天麻杜仲胶囊对小鼠巨噬细胞活性的调节作用[J];安徽农业科学;2008年33期

3 管延杰;张蕾;陈爽;侯振中;;亚急性硒中毒对小鼠巨噬细胞与抗体形成细胞的影响[J];中国兽医杂志;2012年09期

4 赵婷;黄小丹;;MAPK信号通路在瘦素诱导小鼠巨噬细胞IL-1α表达中的作用[J];仲恺农业工程学院学报;2010年01期

5 杨鸣琦,张黎,周宏超,黄增荣,路宏朝;豆类丝核菌次级代谢产物的抑瘤作用及其对荷瘤小鼠巨噬细胞活性的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2003年S1期

6 李倬,胡庭俊;牦牛转铁蛋白对小鼠巨噬细胞释放一氧化氮的影响[J];中兽医医药杂志;2004年03期

相关会议论文 前10条

1 王凯芳;边云飞;肖传实;;不同浓度的氧化型低密度脂蛋白对小鼠巨噬细胞过氧化物酶体增殖因子活化受体δ表达的影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

2 陈维霞;张伟云;;虫草菌菌丝体多糖对小鼠巨噬细胞功能的调节作用[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年

3 郑梅琴;陆宇;王彬;付雷;;抗结核药物细胞筛选模型的建立与应用研究[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

4 郑梅琴;陆宇;王彬;付雷;;抗结核药物细胞筛选模型的建立与应用研究[A];第十届全国化疗药理暨抗感染药理高峰论坛资料汇编[C];2010年

5 王新春;许平;刘北彦;;板蓝根磷脂对内毒素血症小鼠巨噬细胞膜脂的影响[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年

6 敖彩卉;;吡格列酮通过抑制核因子-κB的活化而抑制脂多糖刺激小鼠巨噬细胞产生磷脂酶A2及肿瘤坏死因子-α[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年

7 陈哲生;孙明杰;刘振龙;;噻唑蓝比色法来测定人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

8 杨晓彤;任文智;马伟超;杨明俊;糜可;冯慧琴;杨庆尧;;云芝糖肽(PSP)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的双向免疫调节作用[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年

9 许平;王新春;刘北彦;;板兰根磷脂对内毒素血症小鼠巨噬细胞膜脂成分的影响[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年

10 付度关;王丽;曾和松;;肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β对小鼠巨噬细胞内ABCA1表达及功能的影响[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年

相关博士学位论文 前10条

1 王砚春;清道夫受体A在小鼠巨噬细胞抗钩端螺旋体中的作用研究[D];上海交通大学;2015年

2 郭长明;鱼源无乳链球菌感染小鼠巨噬细胞差异转录基因的筛选及功能研究[D];南京农业大学;2014年

3 许雷鸣;Annexin-1对小鼠巨噬细胞的功能影响及机制研究[D];华中科技大学;2009年

4 冯雪莹;小鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的炎症调节及性别差异[D];北京协和医学院;2011年

5 张鹏宇;激活素调控小鼠巨噬细胞活性的信号传导机制研究[D];吉林大学;2006年

6 刘博;小鼠巨噬细胞TLR2、TLR4及RP105在金黄色葡萄球菌感染中的天然免疫应答机制[D];吉林大学;2013年

7 项洋;衰老小鼠巨噬细胞microRNA表达及其调控机制研究[D];北京协和医学院;2011年

8 刘倩宏;深度测序技术对羊布鲁菌16M株感染小鼠巨噬细胞转录组学的研究[D];吉林大学;2012年

9 李冠霖;炭疽致死毒素对小鼠巨噬细胞杀伤机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

10 李昌麟;1.PMA诱导HL-60细胞分化过程中TLR2和TLR4以及CD14的表达动力学研究 2.小鼠巨噬细胞热休克反应通过IkBa/NF-kB信号通路抑制LPS诱导的白细胞介素12表达[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2002年

相关硕士学位论文 前10条

1 袁莎;羊种布鲁氏菌对巨噬细胞MHC II表达和递呈的影响[D];石河子大学;2015年

2 刘朋涛;一氧化氮/非对称性二甲基精氨酸在布鲁氏菌侵染过程中的响应特征[D];石河子大学;2015年

3 陈琛;NNK联合LPS孵育对小鼠巨噬细胞的增殖及相关基因表达的影响[D];青岛大学;2015年

4 陈楚翘;CD38缺失对小鼠巨噬细胞TLR2介导的炎症反应的影响及机制研究[D];南昌大学医学院;2015年

5 杨丽;卡介苗热休克蛋白16.3基因突变株对小鼠巨噬细胞RAW 264.7自噬的影响[D];成都医学院;2016年

6 陶科融;人羊膜间充质干细胞在体内外对小鼠巨噬细胞表型及IL-10表达的影响研究[D];遵义医学院;2016年

7 林秋茹;棉酚通过非经典炎症小体通路诱导小鼠巨噬细胞发生焦亡[D];暨南大学;2016年

8 李启峰;类泛素蛋白SUMO在布鲁氏菌感染小鼠巨噬细胞过程中的作用研究[D];石河子大学;2016年

9 胡梦薇;两种布鲁氏菌弱毒株侵染小鼠巨噬细胞过程的荧光表征及分析[D];石河子大学;2016年

10 程菲儿;巴氏蘑菇多糖对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞MAPK信号转导通路的作用研究[D];山西农业大学;2016年

，

本文编号：2540443