鸡α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性的测定

发布时间：2019-09-24 13:10

【摘要】：将克隆的鸡α干扰素(ChIFNα)基因亚克隆至酵母表达载体pPICZα-A中,构建重组质粒pPIC-ChIFNα,线性化后电转化整合到毕赤酵母菌株X-33基因组中,得到阳性菌株。经1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE检测结果表明鸡α干扰素在酵母中获得了分泌型表达,表达产物分子质量约为18 ku。细胞病变抑制法检测其效价为1×10~(7.69)U/mL;在鸡胚中能有效抑制禽流感病毒H9N2的增殖。针对Ⅰ群4型禽腺病毒YBAV-4株强毒的动物攻毒保护试验结果显示,表达的蛋白具有较好的抗病毒活性。
【图文】：

010-110-210-310-410-510-610-710-8表达上清处理组Treatedgroupbyexpressionproduct感染鸡胚Infectedchickenembryo53110000未感染鸡胚Normalchickenembryo02445555对照组Controlgroup感染鸡胚Infectedchickenembryo55555554未感染鸡胚Normalchickenembryo0000000110-9053210-100514不同稀释倍数病毒接胚后的感染情况InfectionstatisticsofchickenembryoinoculatedbydifferentdilutionofH9N2virus组别Groups鸡胚Chickenembryo图1重组酵母菌的鉴定结果Fig.1IdentificationofrecombinantX-33byPCRM：DNA分子质量标准；1～3：重组菌株；4：未重组菌M：DL2000DNAMarker；1—3：PositiverecombinantX-33；4：Unre-combinantX-33M12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp图2不同重组酵母菌株的表达Fig.2ProductofchickenalphainterferonofX33-pPIC-ChIFNαM：蛋白质分子质量标准；1～2：分别为阳性菌株1、2M：ProteinMarker；1—2：Strainof1，2，respectivelyM12116.0ku66.2ku45.0ku35.0ku25.0ku18.4ku14.4ku2.2重组酵母菌株的诱导表达分别取阳性菌株的诱导表达上清，经10倍浓缩，进行SDS-PAGE电泳检测。结果可见，阳性菌株经诱导的上清中可见鸡α干扰素蛋白表达，大小约为18ku（见图2）。2.3细胞病变抑制法检测表达蛋白的活性采用细胞病变抑制法，在CEF细胞上检测酵母表达鸡α干扰素蛋白对于水泡性口炎病毒（VSV）的抑制效果。表达产物与CEF细胞共孵育24h后，用100TCID50的VSV攻毒。Reed-Muench法计算能抑制50％细胞病变的干扰素最高稀释度即鸡α干扰素效价为1×107.69/mL。2.4鸡胚上抑制禽流感病?

chickenembryo55555554未感染鸡胚Normalchickenembryo0000000110-9053210-100514不同稀释倍数病毒接胚后的感染情况InfectionstatisticsofchickenembryoinoculatedbydifferentdilutionofH9N2virus组别Groups鸡胚Chickenembryo图1重组酵母菌的鉴定结果Fig.1IdentificationofrecombinantX-33byPCRM：DNA分子质量标准；1～3：重组菌株；4：未重组菌M：DL2000DNAMarker；1—3：PositiverecombinantX-33；4：Unre-combinantX-33M12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp图2不同重组酵母菌株的表达Fig.2ProductofchickenalphainterferonofX33-pPIC-ChIFNαM：蛋白质分子质量标准；1～2：分别为阳性菌株1、2M：ProteinMarker；1—2：Strainof1，2，，respectivelyM12116.0ku66.2ku45.0ku35.0ku25.0ku18.4ku14.4ku2.2重组酵母菌株的诱导表达分别取阳性菌株的诱导表达上清，经10倍浓缩，进行SDS-PAGE电泳检测。结果可见，阳性菌株经诱导的上清中可见鸡α干扰素蛋白表达，大小约为18ku（见图2）。2.3细胞病变抑制法检测表达蛋白的活性采用细胞病变抑制法，在CEF细胞上检测酵母表达鸡α干扰素蛋白对于水泡性口炎病毒（VSV）的抑制效果。表达产物与CEF细胞共孵育24h后，用100TCID50的VSV攻毒。Reed-Muench法计算能抑制50％细胞病变的干扰素最高稀释度即鸡α干扰素效价为1×107.69/mL。2.4鸡胚上抑制禽流感病毒增殖的活性将表达上清分别与10-1～10-9稀释度的H9N2亚型禽流感病毒孵育，接入SPF鸡胚检测感染情况。结果显示，表达上清处理组的鸡胚EID50为1×10-2.46，对照组的EID50为1×10-9.16，中和指数为1×106.7（见表1）。2.5动
【作者单位】： 青岛易邦生物工程有限公司;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;
【分类号】：S852.2

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本文编号：2540882