绵羊Musclin基因启动子顺式元件的EMSA与突变分析

发布时间：2019-10-10 19:27

【摘要】：Musclin是一种具有调节肌肉生长发育和代谢功能的生物活性因子,由Nishizawa等于2004年通过信号序列示踪技术从小鼠骨骼肌中发现。对于M Musclin基因转录调控机制的研究,特别是绵羊Musclin基因启动子区各种重要顺式作用元件的功能研究,尚未见详尽系统的研究报道。本课题组在前期研究中,已经通过生物信息学分析在绵羊Musclin基因启动子区发现了一些潜在的重要元件。因此,本试验旨在进一步通过突变分析和EMSA技术研究这些顺式作用元件的作用,以为揭示Musclin基因的转录调控机制奠定基础。本试验在课题组前期已经克隆的绵羊Musclin基因启动子序列的基础上，采用将所要研究的顺式作用元件序列突变为酶切位点的方法,分别设计引物扩增,并进一步以EGFP为报告基因，，构建了一系列肌肉相关潜在元件(包括E-box、GA-box、MEF2、 MEF3、FoxO、HMTB、SMAD、VTBP)突变的Musclin基因启动子表达载体MUSCLINproXM-EGFP。将构建好的元件突变载体分别转染小鼠C2C12成肌细胞系,荧光显微镜观察表明元件突变后对该启动子转录调控活性存在不同程度的影响。EGFP的荧光定量PCR结果显示：E-box系列(E1～E8)中,除了E2和E8元件突变后使Musclin启动子转录活性上调外,其它E-box突变均使Musclin启动子转录活性下调;其它元件中,除了GA-box突变使Musclin启动子转录活性下调外,MEF2、MEF3、FoxO、HMTB. SMAD和VTBP元件突变均使启动子转录活性上调。为了对这些元件进行更加深入的探究,选取了E-box、FoxO、VTBP、SMAD、HMTB、 MEF3元件进行了EMSA试验,结果表明：在绵羊肌肉组织提取的核蛋白中,确实存在能够与E1, E2, E5, E8, FoxO, HMTB, SMAD这些顺式作用元件相结合的反式作用因子,进一步确证了这些元件在Musclin基因启动子转录调控中的重要作用。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S826

【参考文献】

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本文编号：2547296