斯氏艾美尔球虫体外培养的研究

发布时间：2019-10-15 11:25

【摘要】：目的：通过将兔肝球虫接种至兔肝细胞中并在体外进行培养,从而获得兔肝球虫病的发病病原即斯氏艾美尔球虫。为进一步研究斯氏艾美尔球虫的生活史、致病性以及针对此病的防治药物和疫苗提供必要的前提条件。方法：将经过驱虫处理的幼兔致死后取出肝脏,进行原代细胞培养,获得稳定的原代细胞后,再转接到24孔培养板中；同时对从长治肉兔养殖场采集的病变肝脏,经分离纯化获得杂质较少的球虫卵囊后,对其进行孢子化培养,待孢子化率达到85%以上时,用机械研磨的方法对其进行破壁,分离子孢子；随后将分离的球虫子孢子接种到已长满培养孔底部的兔肝原代细胞中,观察其增殖情况,以获得斯氏艾美尔球虫卵囊；随后将卵囊接种到健康幼兔体内中,对其致病力进行验证并对结果进行分析。结果:(1)兔肝原代细胞培养的实验结果显示：致死兔子后不放血的操作,较易获得兔肝原代细胞。在培养约16h后出现零星的贴壁,约4-5d后出现稳定的生长情况,经20d左右的培养以及机械刮除干扰细胞后,可获得活力较高的兔肝原代细胞。(2)斯氏艾美尔球虫卵囊孢子化的实验结果显示：在浓度为2.5%的重铬酸钾溶液中,卵囊孵化的最佳温度为32℃,经过约5d可使斯氏艾美尔球虫卵囊孢子化率达到85%以上。(3)接种斯氏艾美尔球虫子孢子至细胞培养板的实验结果显示：刚接种斯氏艾美尔球虫子孢子时,子孢子在显微镜下呈现中部稍微凹陷似弯曲的香蕉状；约1h后子孢子的部分结构已进入细胞内部,1.5h后子孢子已全部进入细胞内部；最初几天无明显变化,直至15d后在镜下发现多量灰白发亮的球虫体,部分肝细胞皱缩、脱落；在28d时已可见到结构完整的球虫卵囊,在34d时兔肝细胞大部分脱落与球虫卵囊悬浮于细胞培养液中。(4)验证实验结果显示：将经2.5%的重铬酸钾溶液培养后的斯氏艾美尔球虫卵囊接种到幼兔体内,1d后粪便开始出现卵囊,9-13d时达到高峰。此时幼兔均出现了程度不一的临床症状,剖解后发现肝脏均存在不同程度的体积增大,肝表面及实质内有大量白色或淡黄色结节,其他内脏器官无明显病理变化。结论:本实验对斯氏艾美尔球虫分离纯化方法进行了改进和综合,获得了试验所需的杂质较少的斯氏艾美尔球虫卵囊和子孢子。之后将兔肝细胞作为载体,在体外成功获得了具有侵袭力的斯氏艾美尔球虫卵囊。
【图文】：

艾美尔球虫,斯氏,卵囊,大配子

图１斯氏艾美尔球虫卵囊逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｏｏｃｙｓｔｓ邋ｏｆ邋Ｓｔｅｉｎｍａｎ打邋Ｅｉｍｅｒｉａ逡逑斯氏艾美尔球虫的抱子生殖阶段，其抱子等人的研究报道则认为是３４护６＂＾８１。在殖体可分为Ａ、Ｂ两型或Ｈ型。洪凌仙肯定其裂殖生殖的代数。据现有资料记载，，的小配子体直径为邋２０－２５＾ｍｌ，小配子发排列Ｗ后趋向四周，因其有２根鞭毛，因的线状结构靠近核处１５２１。大配子周围有＾多与鸡球虫大配子类似的成囊壚粒结构，察，可见大配子无微管，表面微孔的长和家兔致病性研究逡逑旅成因其主要寄生于家兔的肝脏、胆管

统计图,球虫,统计图,幼兔

端稍圆壁薄。接种７ｄ时排出卵襄的数量明显X椉樱苑啾憔导炜杉罅康那虺媛压义细　Ｋ婧蠹柑炻涯沂考本缭黾樱匝閩D３中的幼兔到９ｄ时卵裹排出数量几乎为接种逡逑６ｄ时排出量的２．５倍。由图１０可见，排出的卵裹数量在此期间内快速上升且与接种斯逡逑－２５－逡逑
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.7

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