应用iTRAQ技术对滩羊裘皮差异表达蛋白的研究

发布时间：2019-10-22 20:23

【摘要】：为了研究与滩羊羊毛纤维粗细及弯曲度和特定花穗构成相关的差异蛋白,试验应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白质组学方法,联合多维液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术对滩羊、内蒙古苏尼特羊、中卫山羊和新吉细毛羊的羊皮肤蛋白进行鉴定和筛选,并应用Proteome Discoverer 1.4软件进行定量分析,结合数据库搜索,鉴定出差异蛋白;最后应用生物信息学技术对差异蛋白进行GO分析和Pathway分析。4种羊皮肤中共鉴定到1 161个蛋白,其中内蒙古苏尼特羊与滩羊比对发现30个差异蛋白,中卫山羊与滩羊比对发现112个差异蛋白,新吉细毛羊与滩羊比对发现107个差异蛋白,对各比对组的皮肤差异蛋白进行分析,发现14-3-3蛋白σ亚型、KRT25、KRT34、KRT85、TCHH、KAP6和KAP11.1可能与滩羊羊毛纤维粗细及弯曲度和特定花穗形状的形成有关。本研究可为滩羊优质二毛裘皮选育研究提供科学依据。
【图文】：

电泳图,种羊,电泳图,样品

分析。将各比对组的差异蛋白与上述数据库中的蛋白序列进行比对，根据相似性原理，具有相似序列的蛋白可能也具有相似的功能，将ＢＬＡＳＴ所得的同源蛋白的注释信息转嫁到４种羊皮肤的差异蛋白上，从而研究差异蛋白可能行使的主要生物学功能和参与的代谢或信号通路。２结果２．１ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳用ＢＣＡ蛋白质定量法对４种羊８份皮肤样品进行定量，其样品上样量为２０μｇ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分离后，发现其样品蛋白质条带较为均一，平行度良好（图１）。图１４种羊样品ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图Ｆｉｇ．１ＴｈｅｓａｍｐｌｅＳＤＳ－ＰＡＧＥｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｆｏｕｒｓｈｅｅｐｂｒｅｅｄｓ２．２蛋白质鉴定结果及整体分布分析利用ｉＴＲＡＱ技术对脱盐后的滩羊、中卫山羊、内蒙古苏尼特羊和新吉细毛羊的皮肤样品经质谱分析及Ｍａｓｃｏｔ查库，最终鉴定到４９７３个肽段（ｐｅｐ－ｔｉｄｅ），，鉴定到的蛋白质组（ｐｒｏｔｅｉｎｇｒｏｕｐ）有１１６１个。对鉴定到的１１６１个蛋白依据其质量进行统计，结果见图２Ａ。由图２Ａ可知，其大部分蛋白分子质量在２０～８０ｋｕ之间。对４种羊８份皮肤样品鉴定蛋白进行主成分分析，结果见图２Ｂ。由图２Ｂ可知，同种羊皮肤鉴定蛋白有较好的重复性，不同种羊皮肤蛋白的主成分存在较为显著的差异。２．３各组显著性差异蛋白定量结果分析用内蒙古苏尼特（Ｎ）、中卫山羊（Ｓ）和新吉细毛羊（Ｘ）分别与滩羊（Ｔ）的皮肤蛋白进行差异蛋白分析，各组比较的差异蛋白数量统计结果见表２。由表２可知，内蒙古苏尼特羊与滩

图４差异蛋白ＫＥＧＧ富集分析Ｆｉｇ．４ＫＥＧＧｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｉｎ
【作者单位】：宁夏大学农学院;宁夏农林科学院;内蒙古自治区农牧业科学院;吉林省农业科学院动物营养所;
【基金】：宁夏农业育种专项“滩羊品系选育”项目(2013NYYZ0402)
【分类号】：S826

【相似文献】