miR-125a-5p在C2C12细胞增殖分化中的作用及机制研究

发布时间：2019-10-29 07:34

【摘要】：MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约20-25个核苷酸的非编码RNA,通常情况下通过靶向mRNA的3′UTR序列,从而影响mRNA稳定性或抑制蛋白翻译。在成肌细胞的增殖与分化过程中,miRNAs发挥着重要调控作用。目前已知miR-133和mi R-27a能够促进成肌细胞的增殖,miR-1和miR-206能够促进成肌细胞的分化,但仍有许多mi RNAs在成肌中的作用机制尚不清楚,需要作进一步研究。本研究利用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹、流式细胞术及细胞免疫荧光等技术,旨在研究miR-125a-5p在成肌细胞增殖与分化过程中的调控作用。本实验以小鼠C2C12细胞系为实验材料,利用miRNAs的模拟物(mimic)提高mi R-125a-5p的表达量或miRNAs的干扰剂(inhibitor)降低miR-125a-5p的表达量,从而研究miR-125a-5p在成肌细胞增殖与分化中的作用。依据miRNAs的作用机制,结合Targetscan生物信息学软件,预测miR-125a-5p的靶基因,从中筛选出与成肌细胞增殖和分化相关的基因。构建包含mRNAs 3′UTR的psiCheck-2双荧光素酶基因报告载体,与mimic共转染HEK293T细胞检测荧光强度。获得如下主要结果:1.MiR-125a-5p抑制C2C12细胞的增殖在C2C12细胞增殖阶段,miR-125a-5p和E2F3的表达呈相反趋势;过表达mi R-125a-5p抑制细胞周期蛋白CyclinD1的表达水平(P0.05),DNA复制(P0.05),并导致细胞G1期停滞(P0.05);干扰miR-125a-5p之后,细胞周期蛋白CyclinD1的表达水平,DNA复制及细胞周期均不受影响。2.MiR-125a-5p对C2C12细胞分化无显著影响过表达或干扰miR-125a-5p,均不影响成肌细胞分化标志基因MyoD与MyHC表达水平及成肌细胞分化指数。3.E2F3是mi R-125a-5p的靶基因干扰E2F3能够抑制细胞周期蛋白CyclinD1的表达(P0.05);通过双荧光素酶基因报告载体系统确定E2F3为miR-125a-5p的靶基因。综上所述,过表达miR-125a-5p通过靶向作用于E2F3抑制C2C12细胞增殖,但对其分化不产生影响。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.2

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本文编号：2553434