MIR-15B-5P在内皮细胞中介导ICAM-1调控FAK表达的研究

发布时间：2019-11-21 05:24

【摘要】：炎症反应是一种常见的有机体对外来刺激做出防御性反应的病理过程。通常,炎症反应作为机体的一种自动防御系统是有益于机体的,但是过度性的、失控性的炎症反应会对机体造成极大的伤害。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪后引起的猪肺损伤主要是因肺部过度的炎症反应所致。目前,对于这种肺损伤尚无有效的治疗方法。在炎症反应过程中,大量的中性粒细胞被肺血管内皮捕获,黏附于内皮上,并最终进行跨内皮迁移、渗出,破坏内皮的完整性,导致其渗透性增加而造成肺水肿。细胞间粘附分子1(ICAM-1)在中性粒细胞被内皮捕获、迁移、活化并渗出的过程中扮演了十分重要的角色。黏着斑激酶(FAK)能够介导细胞黏附和迁移,调节黏着斑的翻转,并且还参与了内皮被破坏后的修复过程。有研究表明,内皮受到伤害时,内皮细胞的迁移明显增强,同时FAK的磷酸化程度显著提高;当阻止FAK的活化后,内皮细胞的迁移也随之被阻断。本研究探究了FAK的表达与炎症的关系以及ICAM-1对FAK表达的调控,期望为缓解PRRSV感染所致猪肺损伤等过度性炎症反应提供一定的理论基础。本研究首先检测了四种炎症条件下FAK的表达变化,结果显示其显著增加。然后检测ICAM-1基因敲除对FAK表达的影响,发现FAK的表达显著降低。同时,我们发现ICAM-1基因敲除能够促进miR-15b-5p的表达,且利用生物信息学软件预测发现miR-15b-5p能够靶向FAK的3’UTR区。随后我们利用双荧光素酶实验证明了miR-15b-5p能够靶向FAK的3’UTR区。最后,在细胞水平超表达miR-15b-5p,结果表明超表达miR-15b-5p能够抑制FAK的表达。因此,本研究试验结果表明炎症能够促进FAK的表达以及ICAM-1能够通过miR-15b-5p调控FAK的表达。
【图文】：

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炎症环境下 FAK 的表达变化1 Poly（I:C）模拟病毒刺激小鼠脑微血管内皮细胞（b.E用 Poly(I:C)刺激 b.End.3 细胞，在炎症条件下检测 FAK的表达变化，Po度分别为 5.0 μg/ mL、25.0 μg/ mL、50.0 μg/ mL。Poly(I:C)处理细胞细胞提取总RNA ，48 h后收细胞提取总蛋白。分别利用Western blot和 FAK 的表达，与对照组比较，Poly(I:C)刺激后细胞中 FAK 的蛋白和 m量均显著增加（Fig. 3）。随着 Poly(I:C)浓度的变化，FAK 的蛋白和 m量亦随之变化。

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华中农业大学 2017 届硕士研究生学位论文2 LPS 模拟细菌刺激小鼠脑微血管内皮细胞（b.End.3）用 LPS 刺激 b.End.3 细胞，在炎症条件下检测 FAK 的表达变化，LPS别为 0.1 μg/ mL、1.0 μg/ mL、5.0 μg/ mL。LPS 处理细胞 24 h 后收细胞NA ，48 h 后收细胞提取总蛋白。分别利用 Western blot 和 qPCR 检测达，，与对照组比较，LPS 刺激后细胞中 FAK 的蛋白和 mRNA 表达量均Fig. 4）。随着 LPS 浓度的变化，FAK 的蛋白和 mRNA 表达量亦随之变
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.4

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