广西陆川某猪场猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE基因的分析

发布时间：2019-11-21 08:15

【摘要】：为了确诊猪伪狂犬病病毒(PRV)的感染,探讨目前广西猪群中流行的PRVgE基因的变异特征,为更好地防控猪伪狂犬病(PR)提供参考依据,本研究采集了广西陆川某猪场保育猪群发生呼吸道症状的肺脏组织,并用Vero细胞进行病毒分离,应用PCR方法对分离株的gE基因进行克隆和测序,根据测序结果证实分离到1个PRV毒株,命名为GXLC1。分离株在Vero细胞上增殖,细胞出现典型的病变;GXLC1株gE基因与GenBank上20株国内外具有代表性参考毒株的核苷酸序列同源性为97.1%~99.4%,氨基酸同源性为94.3%~99.6%;gE基因的遗传进化分析显示,GXLC1株与2012年的国内流行毒株亲缘关系较近,与欧美分离株亲缘关系较远;氨基酸序列分析显示,GXLC1株gE蛋白主要抗原表位区较之国内经典强毒株有3个氨基酸位点的变异,可能导致gE抗原性发生改变。本研究将分离到的1个PRV毒株进行了gE基因的分析,发现GXLC1株为近年来流行的变异株,gE蛋白在抗原表位区上有3个氨基酸位点的变异,这是否会影响GXLC1株毒力和抗原性的变化,还有待进一步研究;对gE基因变异特征的分析和病毒的分离为进一步丰富广西PRV的分子流行病学和疫苗的研制提供参考依据和重要材料。
【图文】：

ＰＲＶ接种Ｖｅｒｏ细胞３６ｈ的细胞病变Ａ．Ｖｅｒｏｃｅｌｌｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＰＲＶｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎＶｅｒｏｃｅｌｌｓ图２Ｖｅｒｏ细胞３６ｈ细胞病变观察结果（２０×）Ｆｉｇ．２Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＶｅｒｏｃｅｌｌｓ（２０×）Ｍ．ＤＮＡ标准ＤＬ２０００；１～２．ｇＥ基因的扩增Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１－２．ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｇＥｇｅｎｅ图３ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的扩增Ｆｉｇ．３ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇＥｇｅｎｅｏｆＧＸＬＣ１２．４ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的同源性比较和进化树ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与ＧｅｎＢａｎｋ上的２０条参考序列进行同源性分析结果显示ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与２０条参考序列的核苷酸同源性为９７．１％～９９．４％，氨基酸同源性为９４．３％～９９．６％。ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与经典强毒Ｍｉｎ－Ａ、Ｒｉｃｅ和ＳＣ的核苷酸同源性分别为９８．７％、９７．２％和９９．０％；氨基酸同源性分别为９７．２％、９４．３％和９７．８％。将ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因推导的氨基酸与经典强毒株Ｍｉｎ－Ａ株、Ｒｉｃｅ株、ＳＣ和２０１２年国内流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分离株）进行比对，发现ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与近期国内流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分离株）在第４８和４９６位氨基酸均有１个天冬氨酸（Ａｓｐ）的９张民秀等：广西陆川

ＰＲＶ接种Ｖｅｒｏ细胞３６ｈ的细胞病变Ａ．Ｖｅｒｏｃｅｌｌｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＰＲＶｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎＶｅｒｏｃｅｌｌｓ图２Ｖｅｒｏ细胞３６ｈ细胞病变观察结果（２０×）Ｆｉｇ．２Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＶｅｒｏｃｅｌｌｓ（２０×）Ｍ．ＤＮＡ标准ＤＬ２０００；１～２．ｇＥ基因的扩增Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１－２．ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｇＥｇｅｎｅ图３ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的扩增Ｆｉｇ．３ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇＥｇｅｎｅｏｆＧＸＬＣ１２．４ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的同源性比较和进化树ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与ＧｅｎＢａｎｋ上的２０条参考序列进行同源性分析结果显示ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与２０条参考序列的核苷酸同源性为９７．１％～９９．４％，氨基酸同源性为９４．３％～９９．６％。ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与经典强毒Ｍｉｎ－Ａ、Ｒｉｃｅ和ＳＣ的核苷酸同源性分别为９８．７％、９７．２％和９９．０％；氨基酸同源性分别为９７．２％、９４．３％和９７．８％。将ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因推导的氨基酸与经典强毒株Ｍｉｎ－Ａ株、Ｒｉｃｅ株、ＳＣ和２０１２年国内流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分离株）进行比对，发现ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因与近期国内流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分离株）在第４８和４９６位氨基酸均有１个天冬氨酸（Ａｓｐ）的９张民秀等：广西陆川

【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 覃雨阳;李雪梅;马军;吴军;冯淑萍;熊毅;何奇松;;广西地区猪伪狂犬病病毒gE基因的序列分析[J];动物医学进展;2016年01期

2 林群群;郑小香;陈秋勇;陈鹏强;曾显成;胡崇伟;修金生;;猪伪狂犬病病毒NP株的分离鉴定[J];动物医学进展;2015年03期

3 童武;郑浩;单同领;刘飞;梁超;李国新;姜一峰;于海;高飞;周艳君;童光志;;伪狂犬病毒变异株(JS-2012)对仔猪的致病性研究[J];中国动物传染病学报;2014年05期

4 赵鸿远;彭金美;安同庆;李琳;冷超粮;陈家锃;王倩;常丹;张秋月;蔡雪辉;童光志;田志军;;猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征[J];中国预防兽医学报;2014年07期

5 罗廷荣,唐璋辉,蒋小红,孙文博,刘芳,陆芹章,黄伟坚,余克伦;二株广西猪繁殖与呼吸综合征流行毒M基因的克隆和序列分析[J];中国预防兽医学报;2004年02期

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 李春禄;马文才;乔明明;杨欣艳;张彦明;;某规模化猪场伪狂犬病的诊断[J];动物医学进展;2016年12期

2 李宁;吴志明;闫若潜;赵雪丽;王淑娟;马震原;周兵强;刘毅;张珂;;2012-2014年河南省猪伪狂犬病病毒gE基因和TK基因的遗传变异分析[J];中国兽医学报;2016年10期

3 吴学敏;陈秋勇;陈如敬;修金生;车勇良;王隆柏;严山;刘玉涛;王晨燕;周伦江;;猪伪狂犬病病毒福建新分离株gB基因的变异研究[J];中国预防兽医学报;2016年10期

4 冷依伊;任梅渗;蒙正群;杨泽晓;姚学萍;王印;;猪伪狂犬病病毒致病机理及其变异的研究进展[J];养猪;2016年05期

5 黄元;陈晶;赵翠玲;陈锦良;向蓉;王晓虎;向华;黄忠;;伪狂犬病病毒变异株的鉴定及伪狂犬病的防控[J];中国畜牧兽医;2016年09期

6 吴志伟;戴爱玲;范克伟;方来杉;江丹丹;卢马英;黄元华;;龙岩市某规模化猪场猪伪狂犬病病毒及抗体检测[J];动物医学进展;2016年08期

7 方琳;朱辉;李烨;张思远;彭特;叶贺佳;;陕西省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及其gE基因遗传变异分析[J];动物医学进展;2016年08期

8 谢海燕;温清萍;王健青;;广东省东莞市2010—2014年猪伪狂犬病野毒抗体监测与分析[J];中国动物检疫;2016年07期

9 陈超;刘存;李海娥;薛瑞雪;田野;孙圣福;张月;孙振;姜世金;田夫林;;山东省免疫猪场猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE毒力基因的序列分析[J];中国兽医学报;2016年06期

10 朱秀高;李艳青;叶晶;唐万勇;丁文格;柯佳晶;石勇耀;程福生;蒋文明;陆军;;2015年北方部分省份规模化猪场伪狂犬病感染状况分析与建议[J];养猪;2016年03期

【二级参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘芳;薛辉;秦树英;於庆雄;蹇慧;韦祖樟;陈樱;龙凤;黄伟坚;;广西猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE基因序列分析[J];养猪;2014年05期

2 赵鸿远;彭金美;安同庆;李琳;冷超粮;陈家锃;王倩;常丹;张秋月;蔡雪辉;童光志;田志军;;猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征[J];中国预防兽医学报;2014年07期

3 吴忆春;;某猪场猪伪狂犬病病毒与猪瘟病毒混合感染的诊断[J];动物医学进展;2014年06期

4 马力;杨丽梅;徐倩倩;王艳;张颖;张志美;郭时金;沈志强;王艳萍;;猪伪狂犬病病毒gE蛋白在野毒诊断中的应用进展[J];中国畜牧兽医;2014年02期

5 杨志远;韩春华;林健;赵景义;李栋梁;刘月焕;;某规模化猪场猪伪狂犬病的诊断[J];中国畜牧兽医;2013年12期

6 张文通;魏凤;李峰;王金良;苗立中;沈志强;;一例猪伪狂犬病的PCR诊断[J];动物医学进展;2013年11期

7 占松鹤;殷冬冬;姜安安;郭浩;朱良强;范红结;王桂军;;猪伪狂犬病毒安徽株gE基因的克隆和序列分析[J];中国动物传染病学报;2013年05期

8 吴云飞;朱玲;徐志文;周远成;魏浩澈;杨雪;郭万柱;;伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及增殖特性[J];中国兽医科学;2013年06期

9 童武;张青占;郑浩;刘飞;姜一峰;单同领;周艳君;童光志;;免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J];中国动物传染病学报;2013年03期

10 郝飞;汤德元;曾智勇;李春燕;罗险峰;甘振磊;刘建;王洪光;;猪伪狂犬病基因工程疫苗的研究进展[J];猪业科学;2013年03期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 程晓霞;陈少莺;胡奇林;朱小丽;林锋强;;猪伪狂犬病病毒在几种细胞中增殖情况的比较[J];福建畜牧兽医;2006年06期

2 杨润德;郁宏伟;张洪德;刘晓慧;崔奕杰;秦彤;李潭清;范京惠;;猪伪狂犬病病毒的分离鉴定[J];中国兽医杂志;2008年01期

3 皇甫和平;王川庆;;猪伪狂犬病病毒豫A株的分离鉴定[J];上海畜牧兽医通讯;2008年06期

4 彭丽英;倪建平;张婉华;何锡忠;徐伟林;;猪伪狂犬病病毒在不同细胞中增殖的研究[J];上海农业学报;2011年04期

5 鲍玉林;;一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定[J];中国畜牧兽医;2012年11期

6 张亮;张坦;郑杰;张发明;张红;孙丰廷;杨国良;陈玲;张洪;王文泉;;猪伪狂犬病病毒北京株的分离鉴定[J];中国畜牧兽医;2012年10期

7 彭丽英;倪建平;冯晓东;徐伟林;;猪伪狂犬病病毒的分离与鉴定[J];上海农业学报;2012年04期

8 邓舜洲,何后军,邬向东,花象柏,谌南辉;二株江西地区猪伪狂犬病病毒的分离与初步鉴定[J];江西农业大学学报;1999年04期

9 韩勇;李文刚;项朝荣;高卫科;王鑫;魏娟;;猪伪狂犬病病毒的分离和鉴定[J];动物医学进展;2007年03期

10 尹秀凤;丁美娟;张海涛;秦进进;孙鑓;许秀梅;汪爱芬;张小飞;薛家宾;;猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及免疫原性初步研究[J];中国畜牧兽医;2014年04期

相关会议论文 前10条

1 张超范;刘杉杉;胡泉博;崔尚金;;猪伪狂犬病病毒野毒环媒恒温检测方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年

2 张超范;崔尚金;刘杉杉;胡泉博;;猪伪狂犬病病毒野毒环媒恒温检测方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

3 李富强;张莉;刘尚高;王双山;靳玉芬;欧阳素贞;;分泌抗猪伪狂犬病病毒(北京株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

4 郭广君;吕素芳;肖跃强;毕研丽;魏凤;沈志强;丁壮;;猪伪狂犬病病毒诊断方法研究进展[A];第五届中国畜牧科技论坛论文集[C];2011年

5 李富强;张莉;刘尚高;杨汉春;王双山;靳玉芬;欧阳素贞;;抗猪伪狂犬病病毒基因工程抗体的研究[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

6 刘建柱;崔玉东;潘兴广;朴范泽;;猪伪狂犬病病毒的分离与鉴定[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

7 易升;胡绍良;;三种不同方法检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的比较[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年

8 沈强;卫秀余;刘婧怡;瞿慧;;一株分离自上海某猪场的猪伪狂犬病病毒(PRV)的生物学特性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年

9 樊淑华;李文刚;吴凤笋;项朝荣;韩勇;卢中华;;猪伪狂犬病病毒闽A株gE基因的克隆表达及其表达蛋白变性复性的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年

10 张超范;刘长明;危艳武;刘霓虹;;致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

相关博士学位论文 前1条

1 郭广君;猪伪狂犬病病毒野毒与基因缺失疫苗株鉴别检测方法的建立及应用[D];吉林大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 董筱萍;猪伪狂犬病病毒LN/1301株的分离鉴定及其毒力基因遗传变异分析[D];辽宁医学院;2015年

2 杨天宁;抗猪伪狂犬病病毒的中草药制剂筛选[D];湖南农业大学;2010年

3 饶宝;猪伪狂犬病病毒和三种主要致病菌的基因芯片检测技术研究[D];河南农业大学;2010年

4 蒋增海;猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒的分离、鉴定[D];华中农业大学;2004年

5 邹蔚然;猪伪狂犬病病毒蛋白激酶基因的克隆和生物信息学分析[D];四川农业大学;2008年

6 赵丽;猪伪狂犬病病毒PCR诊断方法的建立[D];河南农业大学;2007年

7 王键义;猪伪狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息学分析[D];四川农业大学;2008年

8 曾显成;猪伪狂犬病病毒FZ株的分离鉴定及gD基因的克隆[D];福建农林大学;2007年

9 王小武;猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法及多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法的建立[D];中国农业科学院;2008年

10 皇甫和平;猪伪狂犬病病毒豫A株的分离、鉴定及PK基因的克隆与序列分析[D];河南农业大学;2004年

，

本文编号：2563918