犬睾丸肿瘤组织中肿瘤标志物Lin28a和OCT4及P53的表达

发布时间：2020-02-20 12:03

【摘要】：睾丸肿瘤细胞起源于生殖细胞和非生殖细胞,生殖细胞来源者主要为成熟的畸胎瘤,非生殖细胞瘤主要包括支持细胞瘤和间质细胞瘤。本研究将贵宾犬的睾丸肿瘤样组织制成石蜡切片,通过HE染色以及免疫组化染色的方法,镜检观察睾丸肿瘤组织的细胞形态以及P53、Lin28a和OCT4等肿瘤发生相关蛋白的表达水平。结果,通过病理切片HE染色显示睾丸肿瘤组织细胞异常增生,导致正常的睾丸管腔结构消失;肿瘤免疫组化检测显示在睾丸曲细精管的支持细胞内OCT4、Lin28a以及P53等肿瘤发生相关蛋白表达呈阴性,而在曲细精管内的生精细胞表达均呈阳性。该结果对于临床上辅助诊断犬的睾丸肿瘤具有一定的参考价值。
【图文】：

中国兽医科学第47卷图1犬睾丸肿瘤组织Fig.1Caninetesticulartumortissue学检查、临床细胞学检查、病理组织学检查和免疫学检查等[1-2]。病理组织学检查对于诊断肿瘤发生、肿瘤性质、组织学类型、分化程度以及肿瘤的扩散与转移等都起着非常重要的作用，是临床上确诊方法[3]。免疫学检查是利用一系列免疫学技术检测肿瘤标志物，对肿瘤中异常表达的某些物质进行检测[4]。这种检查目前已适用或应用于临床医学，其对于早期、准确诊断肿瘤具有重要的意义。P53、Lin28和OCT4等作为常见肿瘤检测标志，在人类肿瘤的诊断上已得到证实[5-10]。然而在越来越重要的宠物医疗中，相关肿瘤疾病的诊断方法也亟需拓展。本研究通过对宠物犬睾丸肿瘤进行病理学观察，并对Lin28a、P53和OCT4特异性蛋白进行检测，为宠物犬睾丸肿瘤的免疫学诊断方法提供科学参考。1材料与方法1.1病料组织贵宾犬睾丸肿瘤组织是2015年10月采自西北农林科技大学西安动物医院一例病例。1.2主要试剂环保透明剂（编号BA7002B）购自珠海贝索生物技术有限公司。无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠均购自西陇科学股份有限公司。BSA购自Gibico公司。苏木素染色液（编号C0107）购自碧云天生物技术有限公司。家兔源抗P53蛋白抗体（编号bs-8687R）、家兔源抗Lin28蛋白抗体（编号bs-8443R）、家兔源抗OCT4蛋白抗体（编号bs-0830R）均购自北京博奥森生物技术有限公司。DAB染色液试剂盒（编号SP-9000）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.3组织切片将经4％多聚甲醛固定的犬睾丸肿瘤样品（0.6cm3）送至杨凌示范区医院病理科进行石蜡包埋并进行连续切片（厚度约为2m）。将切片分为两组，分别用于HE染色和免疫组化染色。1.4常规HE染色透明：水浴60℃，Baso

第8期腾鑫等：犬睾丸肿瘤组织中肿瘤标志物Lin28a和OCT4及P53的表达图2睾丸肿瘤组织的HE染色Fig.2HEstainingoftesticulartumortissueA：犬睾丸肿瘤组织20×；B：犬睾丸肿瘤组织20×A，B：Caninetesticulartumortissue，respectively.20×图5睾丸肿瘤组织P53分布Fig.5P53stainingoftesticulartumortissueA：犬睾丸肿瘤组织10×；B：犬睾丸肿瘤组织20×；C：犬睾丸肿瘤组织40×；D：犬睾丸肿瘤组织40×A：Caninetesticulartumortissue，10×；B：Caninetesticulartumortis-sue，20×；C：Caninetesticulartumortissue，40×；D：Caninetesticulartumortissue，40×图4睾丸肿瘤组织的OCT4分布Fig.4OCT4stainingoftesticulartumortissueA：犬睾丸正常组织20×；B：犬睾丸肿瘤组织40×；C：犬睾丸肿瘤组织40×；D：犬睾丸肿瘤组织40×A：Caninetesticularnormaltissue，20×；B：Caninetesticulartumortis-sue，40×；C：Caninetesticulartumortissue，40×；D：Caninetesticulartumortissue，40×经Lin28a特异性抗体的免疫组化染色发现，宠物犬睾丸肿瘤组织的曲细精管管腔内的细胞胞浆呈黄色，精原细胞胞浆呈棕黄色，而支持细胞胞浆呈现蓝色。即精原细胞、曲细精管管腔内的细胞表达Lin28a蛋白，而支持细胞不表达Lin28a蛋白（见图3）。Lin28作为一种致癌基因，在肿瘤细胞中过表达并促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤的发展，其在精原细胞、曲细精管管腔内的细胞内的表达异常高。用抗OCT4特异性抗体进行免疫组化染色发现，曲细精管管腔内细胞的细胞核呈现淡黄色和黄色，支持细胞的细胞核呈现蓝色，，即曲细精管管腔内的细胞显著表达OCT4蛋白，支持细胞不表达OCT4（见图4）。在精原细胞瘤、胚胎性癌和卵巢生殖细胞恶性肿瘤中，OCT4是一?

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本文编号：2581328