汶上芦花鸡遗传资源评价及鸡CCT6A过表达研究

发布时间：2020-03-16 01:14

【摘要】：第一部分:汶上芦花鸡的遗传多样性分析汶上芦花鸡分布于山东省汶上县及附近地区,该鸡种因全身羽毛均为黑白相间、宽窄一致的斑纹,俗称“芦花鸡”。汶上芦花鸡的形成历史悠久,是山东省优良地方品种之一,因其耐粗饲、肉质好、抗病力强、产蛋较多,深受群众喜爱,2002年10月被列入山东省地方良种家禽重点保护名录。微卫星又称短序列串连重复(short tandem repeats,STR)或简单串连重复(simple sequence repeats,SSR),是继RFLPs之后出现的第二代分子遗传标记。因具有在基因组中数量多、分布广且均匀、多态性丰富等显性遗传以及检测简便、快捷等特点而被广泛应用于家养动物群体的遗传多样性检测、群体遗传距离分析、起源与进化关系和基因组扫描等研究。本研究采用联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)联合推荐的27对微卫星引物,对济宁汶上芦花鸡的100个个体(60只母鸡,40只公鸡)进行了遗传多样性检测,分析了该群体在DNA水平上的遗传多样性,并提出了可行的保种措施。研究结果如下:1.在27个微卫星位点中,共检测到86个等位基因,每个微卫星座位的等位基因数2到6个不等,平均等位基因数为3.185,平均期望杂合度和多态信息含量分别为0.4655和0.4023。2.对分布在不同地方的三个群体的遗传距离分析表明,群体间的遗传距离在0.05-0.10之间。综上所述,汶上芦花鸡群体的遗传多样性偏低,且群体间存在一定程度的近交和杂合度缺失。因此建议采取保种与开发相结合的方法来保存这一地方品种资源,以通过杂交利用获得的收益促保种,通过扩大保种群、品种选育为开发利用提供保障。第二部分:鸡CCT6A基因过表达的相关研究CCT是真核生物胞浆中的一种分子伴侣,而且在肌动蛋白、微管蛋白的组装和折叠中发挥着重要的作用。鸡CCT6A基因位于19号染色体,包括14个外显子,CDS区1593bp,编码530个氨基酸。本实验室前期对济宁百日鸡的研究发现,从70日龄到300日龄,CCT6A的表达量显著升高,从300日龄到500日龄,CCT6A的表达量显著降低,揭示CCT6A可能在性成熟过程中有重要作用。本研究旨在通过构建鸡体外卵泡膜细胞模型,并利用过表达技术增加CCT6A基因的表达,探究CCT6A基因对卵泡膜细胞的影响,为进一步探究CCT6A基因对鸡卵泡发育的影响提供理论基础。研究结果如下:1.荧光定量和Western Blotting结果显示,与对照组(pcDNA3.1)相比,转染重组质粒(pcDNA3.1-CCT6A)后,CCT6A基因m RNA的表达量和蛋白质表达量均显著上升(P0.05);2.荧光定量结果显示,与对照组(pcDNA3.1)相比,转染重组质粒(pcDNA3.1-CCT6A)后,BCL-2基因和Caspase-3基因的表达量分别上升和下降,但差异不显著(P0.05)。综上所述,与对照组(pcDNA3.1)相比,转染重组质粒(pcDNA3.1-CCT6A)后,CCT6A基因mRNA及蛋白质的表达量显著上升(p0.05),表明过表达载体成功转染到鸡卵泡膜细胞中。过表达CCT6A基因后,鸡卵泡膜细胞中抑制凋亡基因BCL-2的表达升高,Caspase-3基因的表达降低,表明细胞处于抑制凋亡状态,增强了细胞增殖的能力。由此可以得出,在鸡卵泡发育过程中,CCT6A基因可能通过影响了BCL-2基因和Caspase-3基因的表达而间接影响鸡卵泡膜细胞的增殖或凋亡,进而影响鸡卵泡发育过程,具体的调控机制还有待研究。
【学位授予单位】：曲阜师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S831

【共引文献】