二甲双胍对猪精子在常温保存期间的作用及其机理研究

发布时间：2020-03-31 07:30

【摘要】：猪精液的常温保存技术能够使精子在体外保存一定时间,极大地促进了人工授精技术的推广与利用。在猪精子的体外保存过程中,由于各种理化因素,精子质膜与顶体的完整性会受到一定的破坏,造成精子细胞的能量代谢系统受损,精子的品质逐渐降低。因此需要优化常温保存稀释液配方,以维持精子的结构与功能,延长精子在体外的成活时间。二甲双胍是一种二型糖尿病临床治疗药物,能够促进机体对葡萄糖的摄取与利用,并改善机体代谢状况。目前,精子体外保存过程中二甲双胍是否对猪精子具有保护作用尚不清楚。本文拟以公猪精子为试验对象,探究二甲双胍对精子常温保存效果的影响,并且探究二甲双胍是否通过AMPK的介导而影响精子的能量代谢。通过检测精子活率、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、ATP含量、葡萄糖摄取能力、乳酸生成量与乳酸脱氢酶活性,探究二甲双胍对猪精子体外保存效果的影响及其机理。主要结果如下:1.二甲双胍能够改善常温保存猪精子的品质。在稀释液中添加不同浓度的二甲双胍,检测常温保存期间精子的活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位与ATP含量。发现200μmol/L二甲双胍添加组精子活率、质膜完整率、线粒体膜电位与ATP含量显著优于对照组(P0.05);2.二甲双胍通过激活AMPK改善猪精子品质与精子能量代谢。发现精子中活化的AMPK主要定位于精子尾部与赤道环,二甲双胍能够促进AMPK的活化,有利于常温保存过程中精子AMPK活化状态的维持(P0.05),且二甲双胍能够促进精子对葡萄糖的摄取与代谢(糖酵解)(P0.05)。此外,在使用AMPK特异性抑制剂后,发现二甲双胍没有显著改善精子的活率、质膜完整与线粒体膜电位,同时也没有显著提高精子ATP的含量、葡萄糖的摄取能力、乳酸的生成量与乳酸脱氢酶的活性(P0.05)。综上:在常温保存过程中,添加二甲双胍能够激活AMPK,促进猪精子对葡萄糖的摄取与糖酵解,进而改善精子的能量代谢,维持精子活率与精子结构的完整性。因此,在猪精子常温保存稀释液中添加二甲双胍有助于延长猪精子在体外的有效保存时间。
【图文】：

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图 3-1 二甲双胍对常温保存猪精子质膜完整率的影响Figure 3-1 Effect of metformin on boar spermatozoa membrane integrity in 17胍对常温保存猪精子顶体完整率的影响温保存猪精子顶体完整率，本试验使用荧光素标记的花生凝集素 1、5、9、13d 猪精子的顶体进行染色观察并对数据进行统计分行检测并统计，发现二甲双胍对常温保存精子的顶体完整性无

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图 3-1 二甲双胍对常温保存猪精子质膜完整率的影响igure 3-1 Effect of metformin on boar spermatozoa membrane integrity in 17胍对常温保存猪精子顶体完整率的影响温保存猪精子顶体完整率，本试验使用荧光素标记的花生凝集素 1、5、9、13d 猪精子的顶体进行染色观察并对数据进行统计分行检测并统计，发现二甲双胍对常温保存精子的顶体完整性无
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S828

【参考文献】