CircHIPK3在乳腺上皮细胞中的表达分析及功能研究

发布时间：2020-04-04 18:20

【摘要】：circRNA(circular RNA,circRNA)一类特殊的内源性非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子,是近几年RNA领域研究的热点。本研究主要通过催乳素处理的奶牛乳腺上皮细胞的高通量测序结果分析,初步筛选出存在差异表达的circRNA,并在奶牛乳腺上皮细胞中验证其环形结构。初步筛选后,选择circHIPK3作为研究对象,探究circHIPK3对乳腺上皮细胞增殖分化的影响。STAT5 inhibitor实验探究circHIPK3与催乳素诱导的STAT5通路的关系,并进一步探究STAT5inhibitor处理对circHIPK3表达量和对乳腺上皮细胞增殖的影响。最后,探究可变剪接影响因子SRPK1、SRPK2、ADAR、ILF3相关基因对circHIPK3形成的影响。本研究主要取得的结果如下:(1)成功构建了催乳素处理下奶牛乳腺上皮细胞的circRNA文库,其中findcirc鉴定出的circRNA总共有16364条。通过分析发现两个不同状态下显著上调的circRNA的数量为6760,存在显著下调的circRNA的数量为5991,说明催乳素对circRNA的表达有影响。(2)成功验证了10个奶牛乳腺上皮细胞中存在的circRNA,说明circRNA在奶牛乳腺上皮细胞中是大量存在的。(3)circHIPK3在奶牛与C57BL/6J小鼠不同组织(心、肝、脾、肺、肾、胃、肠和乳腺)中均有表达,说明了circHIPK3具有一定的保守性。(4)揭示了circHIPK3促进HC11的增殖,抑制4T1细胞的增殖,对HC11的分化没有影响。(5)circHIPK3的表达量受到催乳素及其诱导的STAT5信号通路的影响,催乳素会显著提高circHIPK3的表达量,而STAT5 inhibitor处理将显著抑制circHIPK3的表达量。STAT5 inhibitor处理也会抑制乳腺上皮细胞的增殖。(6)催乳素通过STAT5信号通路改变可变剪接影响因子SRPK1、SRPK2、ADAR、ILF3等基因的表达量从而间接影响circHIPK3的形成。
【学位授予单位】：江苏师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S823

【参考文献】