SPF鸭TAP单倍型对鸭瘟感染敏感性的影响
发布时间：2020-04-17 11:39
【摘要】：抗原处理相关转运体(Transporter associated with antigen processing,TAP)是主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)I类分子抗原递呈途径中的关键蛋白。本研究利用TAP单倍型无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)鸭,分别通过鸭瘟标准强毒和弱毒疫苗接种试验,分析Tap多态性对鸭瘟致病性和免疫应答能力的影响。本研究首先优化了国家禽类实验动物种子中心培育的HBK-SPF鸭3个TAP单倍型鸭的遗传学检测方法。经过对HBK-SPF种鸭Tap2基因组序列的多态性分析,确定Tap2基因前663 nt为遗传学检测区域。在此基础上建立了Tap2基因分型PCR检测方法,对现存F3代B2、B3和B4系鸭进行遗传学稳定性检测。结果显示,B2和B4系鸭与F0代基因型完全一致,但B3鸭群内出现2种基因型,表明在育种过程中曾发生过一次遗传学污染。利用HBK-SPF鸭B2系TAP蛋白肽结合区的大肠杆菌表达产物制备了特异性单抗1A6。截短表达法初步鉴定单抗针对的抗原表位位于TAP2蛋白~(297)NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI~(322)。利用1A6对鸭外周血淋巴细胞进行间接免疫荧光试验,结果为阳性。对SPF白来航鸡、鸭、SPF长白猪、常规鹌鹑和鹅的十二指肠石蜡切片进行免疫组织化学检测,结果在鸡和鸭肠粘膜固有层检测到大量特异性信号,对鹅、猪和鹌鹑显示阴性。利用1A6对鸭瘟疫苗免疫-攻毒鸭的肠黏膜细胞进行透射电镜检测,在细胞核核膜上清晰看到特异性免疫金颗粒。利用鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)标准强毒株CSC对7日龄B2、B3、B4以及第2代封闭群SPF金定鸭(JD)进行感染试验。结果B3系鸭2 dpi出现死亡,比JD鸭早2 d,死亡鸭盲肠中DEV UL6基因的拷贝数、十二指肠中MHC I类分子、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的平均转录水平,以及哈德氏腺中IgA的含量均高于其它3个品系。利用鸭瘟弱毒活疫苗(K-CKCE株)接种7日龄B2、B3、B4和JD鸭。结果表明,接种前和接种后14 d的B2、B3和B4鸭都能通过免疫组化在肠道粘膜检测到TAP蛋白,而JD鸭免疫14 d后方能达到检测阈值;14和28 d时,B3鸭盲肠中DEV的拷贝数最低,而JD最高;B2系鸭28 d仍能从哈德氏腺和胆汁中检测到高表达的IgA,始终高于其他组,MHC I、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的转录水平上升最快,CD4~+/CD8~+细胞的比值同JD鸭正相反,其它品系鸭的MHC I、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的转录水平逐渐下降。上述研究表明,TAP单倍型绍兴麻鸭(HBK-SPF)与封闭群金定麻鸭(JD-SPF)在对鸭瘟强毒和疫苗接种表现出不同的免疫应答能力,B3系对强毒感染敏感,而B2系对疫苗接种应答能力更强。本研究为选育疫病易感型SPF鸭提供了依据。
【图文】：
黑色下划线表示跨膜区；大方框表示肽结合区；小方框表示 B3 特异性位点Black underline is transmembrane domain; Big box is peptide binding domain; Small box is B3 specific图2.1Tap1 基因型鸭Tap2 编码区序列氨基酸分析Fig. 2.1 Amino acid sequence analysis of Tap1 genotype SPF duck Tap2 CDS
3 代 B 系列鸭 Tap2 基因扩增结果 37 羽第 3 代 Tap2 基因型 B 系列鸭外周血细胞基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩行琼脂糖凝胶电泳检测，观察结果得到大小符合的单一条带，，与目的片 663 bp 的理性对照没有条带。部分个体的 PCR 电泳结果见图 2.2。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15黑色下划线表示跨膜区；大方框表示肽结合区；小方框表示 B3 特异性位点Black underline is transmembrane domain; Big box is peptide binding domain; Small box is B3 specific图2.1Tap1 基因型鸭Tap2 编码区序列氨基酸分析Fig. 2.1 Amino acid sequence analysis of Tap1 genotype SPF duck Tap2 CDS
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.32
本文编号：2630819
【图文】：
黑色下划线表示跨膜区；大方框表示肽结合区；小方框表示 B3 特异性位点Black underline is transmembrane domain; Big box is peptide binding domain; Small box is B3 specific图2.1Tap1 基因型鸭Tap2 编码区序列氨基酸分析Fig. 2.1 Amino acid sequence analysis of Tap1 genotype SPF duck Tap2 CDS
3 代 B 系列鸭 Tap2 基因扩增结果 37 羽第 3 代 Tap2 基因型 B 系列鸭外周血细胞基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩行琼脂糖凝胶电泳检测，观察结果得到大小符合的单一条带，，与目的片 663 bp 的理性对照没有条带。部分个体的 PCR 电泳结果见图 2.2。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15黑色下划线表示跨膜区；大方框表示肽结合区；小方框表示 B3 特异性位点Black underline is transmembrane domain; Big box is peptide binding domain; Small box is B3 specific图2.1Tap1 基因型鸭Tap2 编码区序列氨基酸分析Fig. 2.1 Amino acid sequence analysis of Tap1 genotype SPF duck Tap2 CDS
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.32
【参考文献】
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本文编号：2630819
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