白藜芦醇干预黄曲霉毒素B1对牛乳腺上皮细胞损伤的研究

发布时间：2020-04-18 15:47

【摘要】：黄曲霉毒素因其分布广毒性强,一直以来对畜牧生产都是一个不可忽视的威胁。而对于奶牛来说,黄曲霉毒素不仅毒害奶牛自身同时也可通过牛奶间接威胁人类健康。白藜芦醇在近二十年间被科研人员进行了大量的研究,且已表现出对动物健康有一定的积极作用。本试验以MAC-T细胞作为研究对象,结合黄曲霉毒素B1(AFB1)和白藜芦醇对乳腺上皮细胞的作用效果进行一系列研究。旨在了解白藜芦醇是否能够抵御AFB1在乳腺上皮细胞上的毒害作用,以及最佳作用条件。分别用不同浓度的AFB1和不同浓度的白藜芦醇处理MAC-T细胞。通过对每个处理下的细胞活力、形态以及抗性因子的表达等方面来评估其作用效果,挑选出恰当的处理浓度进行下一步研究。本试验使用AFB1处理MAC-T细胞24 h,结果显示大于等于4 mg/L的处理使细胞活力显著下降。同样在大于等于4 mg/L AFB1处理时,MAC-T细胞表现出总抗氧化能力和线粒体膜电位的显著下降。但AFB1对细胞形态没有明显作用。通过qPCR检测炎性因子及Nrf2信号通路基因转录水平,可见TNF-α、IL-1β和IL-6均没有明显的浓度相关性变化,Nrf2和Keap1基因的转录没有显著增加,相反其下游抗应激基因NQO1的转录量随AFB1浓度增加而增加;IL-8在大于等于6 mg/L AFB1处理下发生显著上调表达。在10 mg/L时HSP70发生显著下调表达。本试验使用白藜芦醇对MAC-T细胞进行相同的检测,发现随着白藜芦醇的浓度增加其细胞毒性也随之增大,在浓度达到30 mg/L时显著下降。而白藜芦醇使细胞总抗氧化能力增加,在40 mg/L时达到显著且线粒体膜电位发生显著超极化。值得注意的是,白藜芦醇在试验中表现出抑制细胞增殖的现象。同时不同浓度的白藜芦醇处理MAC-T时,以10 mg/L为界,细胞骨架产生两种截然相反的变化,即,低浓度下促进细胞边缘片状伪足的形成,高浓度下抑制细胞边缘片状伪足形成。与上一试验中AFB1处理结果类似,白藜芦醇对炎性因子的转录调节并不一致。TNF-α显著下调表达;IL-1β随处理浓度增加而显著增加;IL-8在处理浓度超过40 mg/L时发生上调表达。但是IL-6则在低处理浓度下表达上调高处理浓度下下调表达。对于Nrf2信号通路中的基因转录,在大于20 mg/L的白藜芦醇作用下均发生显著增加。综合前两个试验的结果对AFB1和白藜芦醇交互作用剂量进行选择,进一步确定了4 mg/L AFB1与10 mg/L的白藜芦醇得作用剂量组合。试验结果证实了白藜芦醇可以缓解AFB1在MAC-T细胞上的细胞毒性,包括减少MAC-T细胞在AFB1作用下增加的ROS,调节线粒体膜电位和抑制细胞凋亡。并且通过qPCR测定Nrf2信号传导途径中mRNA转录物的表达,白藜芦醇也显示出良好的调节作用。因此,证明白藜芦醇对MAC-T细胞中的AFB1的毒性具有干预作用。结论:本研究表明白藜芦醇可以改善AFB1对MAC-T细胞的损伤;但是需要控制白藜芦醇的使用剂量,高剂量的白藜芦醇依旧存在毒性。因此,使用时必须控制白藜芦醇剂量。
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黄曲霉毒素,畸形发生,慢性疾病,肝脏损伤

图 1 几种主要的黄曲霉毒素类型Figure 1 Several major aflatoxin typesAFB1 在黄曲霉毒素中具有最强的毒性，这也与其致癌力密切相关。毒素 B 1 是一种公认的高致癌特性、高遗传毒性物质，会增加人类和动症等慢性疾病的风险，1993 年已被国际癌症研究机构（IARC）列为了癌物。AFB1 能够引起植物和动物细胞的起染色体畸变和 DNA 损伤。A过对遗传物质的破坏导致畸形发生，同时它也抑制蛋白质合成、影响细和胎儿发育。在怀孕奶牛中表现为死胎、畸形胎和流产等现象。2 黄曲霉毒素的产生黄曲霉毒素是对人类和动物的健康有很大危害的化合物，，它们会造成肝脏损伤，以及具有致突变，致畸和致癌作用。来自三个不同种属的真

白藜芦醇,异构体,顺式

第一篇文献综述第 2 章白藜芦醇的研究概况异构体存在：顺式-（Z）和反式-（E）。其可在肠道中可被糖苷酶分解释放出白藜芦醇，发挥其药理作用。在紫外线的照射下反式结构会发生光异构化成顺式结构。一项研究表明，紫外线照射顺式白藜芦醇会引起进一步的光化学反应，产生一种名为 Resveratrone‖的荧光分子。反式异构体生理活性强于顺式异构体.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S859.8

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