吉林地区猪流行性腹泻分子流行病学调查

发布时间：2020-04-24 06:39

【摘要】：猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病(PEDV)引起的高度接触性肠道传染病,其临床表现为病猪呕吐、腹泻、脱水、严重者会导致死亡。本病从原来的主要发生季节(当年11月至次年3月)发展成全年均可发生的现象,猪场抗原阳性率达52.24%,屠宰场病原阳性率1.87%,各阶段的猪均可感染,其中新生仔猪最易感,发病率高达100%,病死率可达80%-100%,给生猪养殖业造成了严重的经济损失。由于目前吉林地区疫苗免疫无法有效控制PED的流行,认为该地区PEDV新的变与国内PED疫苗毒株差异较大。为更好地揭示吉林地区PEDV的遗传变异及流行规律,对吉林地区PED的防控工作提供更为全面的理论依据,并研究紧急防治措施,减少该病导致的直接经济损失,规避养殖风险。本研究内容包括:根据GenBank公布的PEDV基因序列,应用Primer 5.0设计特异性引物,对2016年2月至2018年2月期间采自吉林市及舒兰、蛟河、永吉、桦甸、磐石6个县46个猪场的310份病料进行了RT-PCR检测,PCR产物经克隆后,送上海生工测。检测结果表明,46个猪场有19个猪场为PEDV带毒猪场,阳性率为41.3%,310份病料中有80份病料为PEDV阳性,阳性率为25.8%;其中以永吉的猪场阳性率最高,为58.33%,桦甸最低为16.67%;不同季节中以冬季的猪场阳性率居高。经分析证明,PED发病率与地区、猪场免疫程序、季节、温度变化情况关系显著,该地区PEDV与国内多数流行毒株关系较近。结合上述检测数据对吉林市某未免疫猪场进行PED抗体水平评估并通过制定免疫程序、接种方案、生物安全等方案进行防控,通过试验期间3个阶段即2017年5月、2017年12月和2018年2月进行的3次PED-ELISA监测结果表明,按照T-P二联弱毒疫苗的免疫程序进行全群接种、消毒及生物安全条件下PDE的抗体保护率呈平稳升高趋势,该方案可为吉林市地区PED的防控提供参考。
【图文】：

样品,收集管,吸附柱,测序

将吸附柱放入同一个收集管中，将空吸附柱和收集管放入离心机，，9 000 g 离心 1min，向吸附膜中央加入预热到 60 ℃的 Elution Buffer 共计 40 μL，室温孵育 2 min（为提高 DNA 回收浓度，离心后的溶液重新加到吸附柱，再次离心），将所得 DNA 溶液置于-20 ℃保存以备后续试验使用。1.2.6 克隆与测序将 2.2.5 步得到的纯化基因连接到 pMD18-T 载体，连接后的产物转化入感受态细胞，转化产物在 170 r/min、37 ℃条件下恒温摇床内扩增 2 h，将培养产物仔细涂布于含AMP、ITPG、X-gal 的培养基上进行筛选，挑取白斑菌落 PCR 再次鉴定，阳性菌株送上海生工测序。测序结果应用 DNASTAR 软件进行比对分析。1.3 结果1.3.1 PCR 鉴定结果病料经 RNA 提取、反转录，PCR 扩增产物经凝胶电泳结果如图 2-1 所示，样品 3-5、7-14 中的 223bp 出检测到清晰的阳性条带，说明 PEDV 阳性感染。

基因进化

图 1-2 基因进化树Figure 1-2 The phylogenetic tree1.4 讨论检测结果表明，在 6 个市的取样实验调查中，46 个猪场中有 19 个猪场为阳阳性率为 41.30%，310 份病料中有 80 份阳性，阳性率为 25.80%，通过实验数据分吉林市地区规模化猪场 PED 感染严重，其中永吉市、舒兰市、吉林市这三个市相严重，桦甸最轻，结合当地的地理位置气候，山地气候此相对爆发该种病的几率比建议尽量保持圈舍采光充足，降低空气湿度，改善通风速率以确保猪群处于优良的境中，以提高猪群整体健康状况从而减轻 PED感染压力。不同县市仔猪病料 PCR 试验结果表明，吉林地区 6 个县市的猪场阳性百16.67%～58.33%之间，而病料阳性百分比达到 6.12%～34.92%，这表明吉林市各PED 流行相对普遍。不同季节仔猪病料 PCR 试验结果表明，猪场阳性百分比为 14.28%～55.56%，性百分比为 10.71%～37.20%，这表明 PEDV 在吉林省一年四季均可发生，没有明
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.28

【参考文献】