江西部分地区猪源粪肠球菌耐药性及毒力基因检测与分析

发布时间：2017-03-23 14:20

  本文关键词：江西部分地区猪源粪肠球菌耐药性及毒力基因检测与分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：粪肠球菌以往被认为是人类及动物的共生菌,但近十几年来,其引起人和动物发生感染性疾病的报道越来越多,这主要是与其耐药性和毒力增强有一定的关联。为了解和评估该地区粪肠球菌对人和猪养殖业的潜在威胁,本研究通过选择性培养基、PCR技术分离鉴定粪肠球菌,再对分离株进行药敏试验,最后采用PCR技术检测粪肠球菌的相关耐药基因及毒力基因,结果如下:2014年至2015年间从江西省7个不同地区部分猪场采集349份新鲜猪粪样,其中197份腹泻粪样和152份正常粪样。经两重选择性培养筛选和特异性PCR扩增确定,共分离并鉴定出226株粪肠球菌,分离率为64.8%,其中腹泻粪便粪肠球菌分离率(72.6%)高于正常粪便分离率(54.6%)。各地区中九江地区采集的样本分离率最高(82.2%),宜春地区次之(80.4%),抚州地区分离率最低(35.9%),且各地区分离率总的来说差异显著。采用纸片扩散法对226株猪源粪肠球菌进行7种抗菌药物药敏试验。试验结果显示,江西省猪源粪肠球菌分离株多重耐药性严重,多重耐药分离株有117株(78.32%);其中分离株对红霉素和多西环素耐药率较高,分别为97.35%和92.48%,对环丙沙星和氟苯尼考耐药率相对较低,分别为65.04%和61.95%,统计发现,粪肠球菌分离株对多西环素的耐药率存在显著性差异;本研究仅在赣州地区发现3株对氨苄西林耐药的菌株;未发现对万古霉素或替考拉宁耐药菌株。226株粪肠球菌分离株有14种耐药表型,其中以红霉素+环丙沙星+多西环素+氟苯尼考耐药表型在分离株中比较流行。通过PCR方法对226株粪肠球菌分离株进行氟苯尼考耐药基因检测。试验结果显示,猪源粪肠球菌中携带fexA 158株(69.91%)、cfr 13株(5.75%)和fexB 10株(4.42%)。在本试验中表型对氟苯尼考耐药的菌株均检出了耐药基因,而有22株携带耐药基因的菌株未表现出对氟苯尼考的耐药;江西省猪源粪肠球菌分离株对氟苯尼考耐药的机制主要是fexA基因介导的特异性外排机制。运用PCR方法对226株粪肠球菌进行6种毒力基因检测,试验结果显示,98.23%的粪肠球菌至少携带一种毒力基因,各基因检出率由高到低依次为efaA、ace、gelE、agg、esp和clyA。有170株(75.22%)分离株携带3~5种毒力基因;共检出25种不同毒力基因型,携带gelE+ace+efaA基因型的分离株在江西省较流行。对226株粪肠球菌分离株进行β溶血和明胶溶解表型检测,发现相应的基因型和表现型存在不完全一致的现象。粪肠球菌分离株所携带的毒力基因数与耐药率之间不存在统计学意义,说明携带毒力基因数的多少与抗菌药物的耐药性之间不存在关联。
【关键词】：猪源粪肠球菌 耐药性 耐药基因 毒力基因
【学位授予单位】：江西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 文献综述9-16
• 1 粪肠球菌研究进展9-10
• 2 粪肠球菌的耐药性的研究进展10-12
• 2.1 粪肠球菌耐药性产生的原因10
• 2.2 粪肠球菌的耐药机制10-12
• 2.2.1 粪肠球菌对氟苯尼考耐药机制10-12
• 3 粪肠球菌毒力基因的研究进展12-14
• 3.1 细胞溶血素（Cyl）12-13
• 3.2 明胶酶E（gelE）13
• 3.3 肠球菌表面蛋白（Esp）13
• 3.4 聚集物质（AS）13-14
• 3.5 胶原结合蛋白黏附素（Ace）14
• 3.6 心内膜炎抗原（EfaA）14
• 4 研究目的及意义14-15
• 5 研究内容和研究方法15-16
• 第二章 江西省猪源粪肠球菌的分离鉴定16-25
• 1 材料与方法16-20
• 1.1 材料16-18
• 1.1.1 试验菌株16
• 1.1.2 质控菌株16
• 1.1.3 主要试剂16-17
• 1.1.4 主要仪器设备17
• 1.1.5 主要细菌培养基和试剂的配制17-18
• 1.1.6 克隆载体18
• 1.1.7 Top10感受态细胞18
• 1.2 方法18-20
• 1.2.1 样本采集18
• 1.2.2 猪源粪肠球菌分离和初步鉴定18-19
• 1.2.3 猪源粪肠球菌的PCR鉴定19-20
• 1.2.4 猪源粪肠球菌的保存20
• 1.2.5 数据统计学处理20
• 2 结果与分析20-24
• 2.1 猪源粪肠球菌的分离鉴定20-22
• 2.2 猪源粪肠球菌PCR鉴定结果22
• 2.3 猪源粪肠球菌分离的情况22-24
• 3 讨论24-25
• 第三章 江西省猪源粪肠球菌耐药性分析25-33
• 1 材料与方法25-27
• 1.1 材料25-26
• 1.1.1 试验菌株25
• 1.1.2 质控菌株25
• 1.1.3 主要试剂25
• 1.1.4 主要仪器设备25-26
• 1.1.5 主要细菌培养基和试剂的配制26
• 1.1.6 抗菌药物药敏纸片26
• 1.2 方法26-27
• 1.2.1 纸片扩散法26
• 1.2.2 耐药性的判定26-27
• 1.2.3 数据统计学处理27
• 2 结果与分析27-31
• 2.1 猪源粪肠球菌的耐药率27-29
• 2.2 猪源粪肠球菌分离株在不同地区的耐药特点29-30
• 2.3 猪源粪肠球菌的多重耐药性分析30-31
• 3 讨论31-33
• 第四章 江西省猪源粪肠球菌耐药基因的流行特征分析33-41
• 1 材料与方法33-36
• 1.1 材料33-34
• 1.1.1 试验菌株33
• 1.1.2 质控菌株33
• 1.1.3 主要试剂33-34
• 1.1.4 主要仪器设备34
• 1.1.5 主要细菌培养基和试剂的配制34
• 1.1.6 克隆载体34
• 1.1.7 Top10感受态细胞34
• 1.2 方法34-36
• 1.2.1 猪源粪肠球菌的复苏培养34-35
• 1.2.2 猪源粪肠球菌氟苯尼考耐药基因的PCR技术检测35-36
• 2 结果与分析36-39
• 2.1 猪源粪肠球菌氟苯尼考耐药基因PCR电泳结果36-38
• 2.2 猪源粪肠球菌氟苯尼考耐药基因型在江西省不同地区的分布情况38-39
• 3 讨论39-41
• 第五章 江西省猪源粪肠球菌毒力基因的流行特征分析41-54
• 1 材料与方法41-44
• 1.1 材料41-42
• 1.1.1 试验菌株41
• 1.1.2 质控菌株41
• 1.1.3 主要试剂41-42
• 1.1.4 主要仪器设备42
• 1.1.5 主要细菌培养基和试剂的配制42
• 1.1.6 克隆载体42
• 1.1.7 Top10感受态细胞42
• 1.2 方法42-44
• 1.2.1 猪源粪肠球菌的复苏培养42
• 1.2.2 猪源粪肠球菌毒力基因的PCR技术检测42-44
• 1.2.3 部分毒力基因存在和表型相关性试验44
• 1.2.5 数据统计学处理44
• 2 结果与分析44-52
• 2.1 猪源粪肠球菌毒力基因PCR电泳结果44-49
• 2.2 猪源粪肠球菌分离株携带毒力基因在江西省的分布情况49-50
• 2.3 猪源粪肠球菌耐药性与毒力基因关系50-51
• 2.4 部分毒力基因存在和表型相关性试验结果51-52
• 2.4.1 β溶血表型和clyA基因相关性试验结果51
• 2.4.2 明胶水解表型和gelE基因相关性试验结果51-52
• 3 讨论52-54
• 全文总结54-55
• 参考文献55-62
• 致谢62

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周雪雁;刘翊中;陈轶霞;李倬;刘俊林;;牦牛肠道粪肠球菌的分离和鉴定[J];微生物学杂志;2013年06期

2 鲍延娥;董晓芳;佟建明;高玉鹏;刘炎;;粪肠球菌益生特性的体外评价[J];西北农业学报;2013年11期

3 羽晓瑜;陆玉霞;;粪肠球菌聚集物质的研究进展[J];中国微生态学杂志;2010年07期

4 王睿,方翼,陈迁,白艳红;粪肠球菌的抗生素后效应[J];中国医院药学杂志;1999年08期

5 黄雁;刘美容;;福建省某鸡场粪肠球菌耐药情况调查[J];国外畜牧学(猪与禽);2008年04期

6 王颖,陈敏,顾其芳,张美英,周培君;应用脉冲凝胶电泳分析粪肠球菌基因的方法研究[J];上海预防医学杂志;2002年06期

7 刘燕霏;杨建德;赵瑞利;;粪肠球菌动物致病的研究进展[J];家畜生态学报;2013年11期

8 潘伟光;李一凡;邓启文;张健华;;1株利奈唑胺耐药粪肠球菌的基因突变检测[J];中国感染与化疗杂志;2013年02期

9 齐亚银;张莉;王静梅;崔茹鹏;莫名;剡根强;;动物源粪肠球菌对7种抗生素耐药表型及耐药基因检测[J];中国兽医学报;2010年07期

10 罗珍兰，谢继志，吴峻宇，，吴立军;乳酸菌胶囊粪肠球菌的分离鉴定及生长特性观察[J];江苏农学院学报;1996年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘静;李昊;王志娟;何美琳;翟静;;504株肠球菌分布及耐药性监测[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

2 华孝挺;蒋琰;俞云松;瞿婷婷;;粪肠球菌和屎肠球菌的利福平耐药突变的分子机制研究[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年

3 郑颖;;123株肠球菌的临床分布和耐药特征分析[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

4 黎四平;;肠球菌感染的检测及耐药性分析[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

5 王娟;刘宇;吴爱慧;周荣斌;;粪肠球菌肺炎1例[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

6 杜田丰;马净植;熊紫兰;卢新培;曹颖光;;载药等离子体对粪肠球菌生物膜的作用[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

7 杨敬芳;时东彦;李继红;王鑫;;临床分离肠球菌的耐药性监测及耐药性分析[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年

8 吕萍;徐樨巍;宋文琪;董方;杨永弘;沈叙庄;;儿童肠球菌多重耐药与Ⅰ类整合子的检测[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

9 尹伟;王姗姗;董明;牛卫东;;饥饿期粪肠球菌生物膜形成及药物敏感性研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

10 董明;王珊珊;牛卫东;;饥饿条件下粪肠球菌生物膜形成相关毒力因子的研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 焦月华;基因组学分析粪肠球菌益生功能及增殖调控研究[D];哈尔滨工业大学;2016年

2 黎满香;感染猪的粪肠球菌的分离鉴定及部分特性和诊断方法研究[D];湖南农业大学;2010年

3 吴敏;粪肠球菌和屎肠球菌毒力基因、PAI相关基因及耐药性分析[D];南方医科大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 史自涛;粪肠球菌对断奶仔猪的营养生理效应研究[D];西南大学;2015年

2 崔红;五味子甲素对粪肠球菌毒力因子作用的初探[D];佳木斯大学;2015年

3 郑婷婷;表面蛋白EF0591对致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05部分生物学特性影响的研究[D];石河子大学;2015年

4 张留君;动物源性粪肠球菌ebp菌毛基因的保守性及其多克隆抗体的制备[D];河南农业大学;2015年

5 欧都·吾吐那生;Ⅰ类整合子介导粪肠球菌多重耐药性的研究[D];石河子大学;2016年

6 王熙楚;表面蛋白EF3183对致羔羊脑炎粪肠球菌XJ11部分生物学特性影响的研究[D];石河子大学;2016年

7 胥彩玉;饲粮中添加粪肠球菌对肉仔鸡生产性能、肉品质和血浆代谢组的影响[D];甘肃农业大学;2015年

8 李英英;粪肠球菌毒力基因ace敲除及其对细菌黏附与生物被膜形成的影响[D];河南农业大学;2014年

9 幸文定;江西部分地区猪源粪肠球菌耐药性及毒力基因检测与分析[D];江西农业大学;2016年

10 刘事达;不同消毒方法对粪肠球菌消毒作用的体外研究[D];上海交通大学;2015年

  本文关键词：江西部分地区猪源粪肠球菌耐药性及毒力基因检测与分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：263930