miR-458b-5p调控基因CTNNB1对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响

发布时间：2020-05-08 22:32

【摘要】：家禽的产蛋性能受到众多因素的影响,但是影响家禽产蛋性状的关键在于家禽卵泡发育的过程。本实验室前期通过高通量测序发现miR-458b-5p在开产与未开产母鸡卵巢中差异表达。为研究miR-458b-5p在鸡卵泡发育过程中的作用,本试验利用qRTPCR方法,检测miR-458b-5p在卵泡中的表达情况,并根据高通量结果确定候选靶基因,进而验证靶向关系,研究miR-458b-5p通过靶向调节靶基因对鸡等级卵泡颗粒细胞增殖的影响,试验结果如下:(1)根据实时荧光定量PCR结果显示,鸡的miR-458b-5p在等级卵泡的膜细胞中高表达,在颗粒细胞中低表达,在这两种卵泡细胞中的表达量差异显著(P0.05)。靶基因CTNNB1在等级卵泡的颗粒细胞中高表达,在膜细胞中低表达,且在这两种卵泡细胞中的表达量差异显著(P0.05)。在等级卵泡中,随着卵泡的增大,CTNNB1基因的表达量随之减少,不同品种的母鸡卵泡中,该趋势接近一致。定量结果表明miR-458b-5p和CTNNB1基因的表达量呈现负相关的趋势。(2)利用Targetscan靶基因预测网站预测miR-458b-5p的靶基因为CTNNB1基因。通过双荧光素酶报告基因活性检测试验,转染miR-458b-5p拟合物后导致野生型载体双荧光素酶报告基因活性比值显著下降(P0.05)。通过蛋白免疫印迹试验可以确定miR458b-5p能够抑制β-catenin蛋白的合成。这些结果表明miR458b-5p与CTNNB1基因存在靶向关系,miR458b-5p可以通过定向结合CTNNB1基因的3'UTR,进而抑制CTNNB1基因mRNA的翻译。(3)根据CCK-8试剂对颗粒细胞的检测结果来看,miR-458b-5p能够抑制体外培养的鸡等级卵泡颗粒细胞的增殖。根据流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡情况的结果,证明miR-458b-5p不能引起鸡等级卵泡颗粒细胞的凋亡。(4)miR-458b-5p的mimics转染到鸡的等级卵泡颗粒细胞后,通过实时荧光定量PCR结果显示其可以引起靶基因CTNNB1表达量的改变,进而影响靶基因CTNNB1所在的Wnt/β-catenin信号通路内相关基因的表达量发生变化,说明miR-458b-5p确实会对Wnt/β-catenin信号通路产生一些影响。在转染miR-458b-5p的鸡等级卵泡的颗粒细胞中,LH受体表达量发生显著变化,这个结果暗示黄体生成素与β-catenin蛋白的合成有某种关联。总之,通过一系列的试验研究结果,可以证明gga-miR-458b-5p靶向调控靶基因CTNNB1,过表达gga-miR458b-5p拟合物会抑制鸡等级卵泡颗粒细胞内β-catenin蛋白的合成以及鸡等级卵泡颗粒细胞的增殖,并在一定程度上影响Wnt/β-catenin信号通路一些相关基因的表达。
【图文】：

鸡卵巢中的各级卵泡Fig1.1Differentlevelsoffolliclesinchickenovaries

miR-458b-5p调控基因CTNNB1对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响

miRNA的生物合成Fig1.2BiosynthesisofmiRNA由于种子序列的特异性高，根据其差异性，，miRNAs被分为多个不同的小RNA家
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S831.3

【参考文献】