玻璃化冷冻对驴卵母细胞亚细胞结构及母源基因表达的影响

发布时间：2020-05-14 07:35

【摘要】：驴是具有很高经济价值的家畜之一。驴肉是美味营养食品、驴奶成分最接近人乳,是人奶最佳替代品,驴皮是制作阿胶的主要原料。但驴自然繁育周期长、繁殖速率低,制约了驴产业的发展。人工繁育技术可提高优良畜种的繁殖率,卵母细胞冷冻保存是家畜人工繁育技术基础之一,也是保存优质家畜遗传资源的有效途径。有关驴卵母细胞冻存的研究鲜有报道。为此本研究采用玻璃化冷冻技术冻存驴不同发育阶段(未成熟生发泡期GV期、体外成熟期IVM-MⅡ)卵母细胞,分析冻存前后卵母细胞成熟率、发育率和亚细胞结构变化;对冷冻前后卵母细胞进行单细胞转录组测序,同时检测与卵母细胞发育密切相关的三种母源基因Nlrp5、Nlrp2和Padi6的表达变化,分析玻璃化冷冻对卵母细胞成熟及发育的影响。研究结果如下:1.冷冻GV期卵母细胞形态正常率与对照比没有显著差异;成熟率和卵裂率显著低于对照组(18.34%VS 52.67%,20.83%VS 41.38%);冷冻IVM-MⅡ期卵裂率显著低于对照组(16.36%VS 41.38%),且卵裂后细胞发育受到阻滞。GV期卵母细胞更适于玻璃化冷冻保存。2.新鲜GV期(对照)、冷冻GV期、冷冻IVM-MⅡ卵母细胞微丝正常率分别为73.07%、40.00%和28.20%;线粒体正常率分别为70.00%、35.16%和25.71%。冷冻卵母细胞微丝出现异常分布的数目增多,线粒体数量也明显减少。冻存后卵母细胞微丝与线粒体分布异常现象GV期较IVM-MII期轻,发育状态也好。3.GV期冷冻卵母细胞皮质颗粒分布正常率显著低于对照(47.22%VS76.60%),IVM-MⅡ期(GV期冷冻处理)卵母细胞皮质颗粒分布正常率相比于对照具有显著差异(24.24%VS 53.85%)。冷冻后卵母细胞皮质颗粒数量与密度明显低于新鲜卵,且皮质颗粒迁移受到阻滞。4.正常卵母细胞成熟过程中(GV、MⅠ、MⅡ)母源基因Nlrp5、Nlrp2和Padi6在MI期上调表达,MII期下调表达;冷冻后卵母细胞母源基因随成熟过程一直呈下调表达趋势,进而影响了卵母细胞的正常发育。以上结果表明GV期为驴卵母细胞玻璃化冷冻的最佳时期,玻璃化冷冻影响了驴卵母细胞亚细胞结构并造成母源基因表达下调,可能因此降低了其成熟与发育潜能。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S822

【参考文献】

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3 李林凤;关伟军;马月辉;史文清;韩俊文;;卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展[J];中国畜牧兽医;2006年05期

4 陈子江,李梅,马金龙,李媛,马水英,高选;不同成熟期人卵母细胞慢速冷冻的初步研究[J];北京大学学报(医学版);2004年06期

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本文编号：2663034