妊娠期全氟辛酸暴露致子代雌鼠肝脏损伤及枸杞多糖缓解作用的研究

发布时间：2020-05-27 04:40

【摘要】：全氟辛酸(Perfluorooctane acid,PFOA)是一种新型持久性有机污染物,广泛存在于日常生活中,如不粘锅、泡沫灭火器、户外冲锋衣、油漆等。长期暴露PFOA会严重危害动物和人体健康,尤其在敏感的妊娠期暴露PFOA,会影响子代的生存及生长发育。枸杞多糖(Lycuim barbarum polysaccharides,LBP)是中药枸杞的主要活性成分,在抗氧化、调节免疫、保护肝脏等方面具有良好功效。本研究通过构建孕期暴露PFOA致仔鼠肝脏损伤模型,探讨PFOA对雌性仔鼠的肝脏损伤作用,以及LBP缓解PFOA毒性的作用机制。PFOA造模试验分为5组,每组随机分配10只孕0 d小鼠。对照组小鼠孕1~17 d每天灌服0.2 mL去离子水,其余4组小鼠每天分别灌服0.2 mL不同剂量(1.0、2.5、5.0、10.0 mg/kg)的PFOA,PND 21采集子代雌鼠肝脏并分离血清。用酶活性试剂盒检测AST、ALT、HAT和HDAC的活性,用ELISA方法检测抗氧化酶及氧化生成物,qPCR法检测脂肪酸氧化过程中相关酶的表达量,Western blot法检测组蛋白乙酰化水平。结果显示,10.0 mg/kg PFOA处理组流产率显著升高(P0.05),5.0和10.0 mg/kg PFOA组仔鼠成活率显著降低(P0.05),各PFOA处理组子代肝脏指数极显著增加(P0.01),其中5和10 mg/kg PFOA组肝细胞肿大,发生脂肪变性。所有PFOA组子代雌鼠血清中AST和ALT活性极显著升高(P0.01),5.0和10.0 mg/kg PFOA组肝脏中SOD水平极显著升高(P0.01),2.5、5.0、10.0 mg/kg PFOA组CAT和8-OHdG的水平极显著升高(P0.01),PFOA处理组PPARα和其调控的有关脂肪酸氧化基因表达紊乱,肝脏中HAT活性降低,HDAC活性升高,anti-acetyl-Histone H3和acetyl-Histone H4表达降低,并且各指标的变化具有PFOA剂量依赖性。上述结果表明,妊娠期暴露PFOA可影响仔鼠生长发育并造成肝损伤,通过PPARα诱导脂质代谢基因异常表达,破坏机体脂质代谢平衡,造成氧化应激,导致HAT和HDAC活性失衡,降低组蛋白乙酰化的程度。5 mg/kg PFOA出现明显肝损伤,与对照组比较差异显著,因此选择5 mg/kg PFOA为最佳造模剂量。LBP治疗试验,孕0 d母鼠60只随机分为6组,每组10只,在孕1~17 d进行给药处理。空白对照组,每天分两次灌服0.2 mL去离子水;PFOA模型组,每天灌服5 mg/kg PFOA溶液和去离子水各0.2 mL;LPB对照组,每天灌服80 mg/kg LBP溶液和去离子水各0.2 mL;LPB治疗组灌服5 mg/kg PFOA溶液,并分别灌服40、80和120 mg/kg LBP溶液。子代雌鼠21日龄和45日龄时采集肝脏和血清,计算仔鼠存活率和肝脏指数,分别检测21日龄和45日龄时AST、ALT、SOD、CAT、8-OHdG、HAT、HDAC、PPARα和脂肪氧化相关酶的水平。结果显示,在PND21,80 mg/kg LBP组与PFOA模型组相比产子数和存活数显著升高,肝脏指数显著降低(P0.05),120 mg/kg LBP组肝脏指数极显著降低(P0.01)。HE染色观察LBP治疗组肝脏坏死面积减少,肝细胞的脂肪变性现象得到减轻。与PFOA造模组相比,LBP治疗组中AST、ALT和8-OHdG水平显著降低,SOD和CAT水平显著升高。此外,LBP用药后HAT活性显著升高,HDAC活性显著降低(P0.05),脂肪酸氧化相关酶的基因表达失衡现象得到明显改善。在PND45,PFOA造模组肝脏脂肪变性程度相比在PND21有所降低,LBP治疗组无明显病变,80和120 mg/kg LBP组的肝脏指数显著降低(P0.05)。在PND45,各组间ALT、AST、CAT和HAT水平无显著差异。PFOA造模组中SOD和8-OHdG的水平与空白组间存在显著差异。LBP治疗组中HDAC的活性显著降低,脂肪酸氧化相关酶的表达得到明显调节。结果表明,LBP可以提高仔鼠的产子数,存活率,缓解PFOA造成肝脏脂肪变性,降低肝脏指数,缓解肝脏氧化应激,提高组蛋白乙酰化水平,并且对正常机体不产生损害作用。
【学位授予单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S859.8

【参考文献】