马源隐孢子虫及毕氏肠微孢子虫系统进化与多位点研究

发布时间：2020-05-30 12:15

【摘要】：隐孢子虫(Cryptosporidium)和毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)是两种重要的肠道原虫,能够感染包括人在内的多种动物。目前,这两种寄生虫已在我国的人、家畜、伴侣动物、啮齿类、禽类、甚至大熊猫上有所报道,但有关其在马中的感染情况、虫种或者基因型则鲜有报道。本试验收集了2015年8月至2017年5月期间采自四川省和云南省共7个马术俱乐部的马粪便样品共计441份,利用巢式聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)的方法扩增隐孢子虫18S rRNA基因鉴定出阳性粪便样品6份,总的感染率为1.4%;对隐孢子虫18S rRNA基因序列分析共鉴定出两种隐孢子虫虫种:人隐孢子虫(Cryptosporidium hominis,C.hominis)和安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni,C.andersoni);通过对C.hominis的gp60(60 kDa glycoprotein gene)基因的DNA序列多态性进行分析,鉴定其亚型为IIdA15。运用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)对C.andersoni分离株进行亚型分析,鉴定出A6、A5、A2、A1亚型,该亚型曾在我国河南省和四川省骆驼上有所报道,被认为是具有种间传播潜力的亚型。本试验基于毕氏肠微孢子虫转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)基因鉴定出阳性粪便样品87份,总的感染率为19.7%,共有10个基因型被发现:基因型horse1,horse2,D和SC02为已知的基因型,基因型SCH1-4和YNH1-2为新基因型。对毕氏肠微孢子虫进行系统进化分析发现基因型D、SC02、horse1和SCH1-3位于具有人兽共患可能性的进化组Group 1中,基因型SCH4属于具有宿主特异性的进化组Group 2,基因型horse2和YNH1-2则属于进化组Group 6中。运用MLST分型方法(MSl,MS3,MS4,MS7)对87份阳性样本进行扩增,分别有13,5,9,14个样本在该位点扩增成功,其中共4个样本在四个位点全部扩增,形成3个MLGs(MLG1-3)。综上所述,本试验对四川省和云南省部分地区的马进行隐孢子虫和毕氏肠微孢子虫检测,其中,隐孢子虫鉴定出C.hominis和C.andersoni。C.hominis的新亚型IIdA15扩大了该虫种的亚型数据库,C.andersoni的亚型A6、A5、A2、A1与该地区牛源和骆驼源亚型一致,在该地区可能存在马与其它动物相互传播的可能性;毕氏肠微孢子虫鉴定出人兽共患基因型D和SC02,该基因型在该地区的人和多种动物有所报道,结果表示马可作为一个潜在的感染源对人或者其他动物进行传播。
【图文】：

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用 ContigExpress 软件进行拼接和处理，下载的相关序列进行比对分析。件比对后的序列应用 MEGA6 软件中毗统发育进化树，同时采取自展值（Boo，四川省成都市青白江马术俱乐部 2 份样乐部分别有 1 份和 3 份样品（D11、E8增，获得约 820bp 目标条带（见图 2-1

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图 3-1 马源毕氏肠微孢子虫 ITS 部分扩增结果Fig 3-1 The results of E.bieneusi positive samples from horses2.2 测序结果将 87 份扩增成功的样品进行分析，共有 10 条不同序列，序列长度分别是 378bp、393bp、404bp、390bp、389bp、381bp、380bp、363bp、379bp 和 379bp。每一个马术俱乐部均检测出阳性样品，各马术俱乐部检测结果见表 3-4。用 SPSS 22.0 软件各马术俱乐部的感染率进行显著性分析，χ2 = 0.02，，df = 7, P < 0.05，差异显著。将测序得到的序列提交至 GenBank 后，序列登录号为：KX276705 KX276714。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.723

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