胶东地区鸡Ⅰ群禽腺病毒的致病性及防控研究

发布时间：2020-06-02 12:51

【摘要】：禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)是一种全世界范围内流行的家禽和野禽常见的传染病病原。Ⅰ亚群禽腺病毒分为A、B、C、D、E 5个种,12个血清型,其中FAdV-8b主要引起包涵体肝炎(IBH),FAdV-4主要引起心包积水-肝炎综合征(HHS)。自2010年以来,鸡Ⅰ群禽腺病毒引起的IBH病例在我国白羽肉鸡中呈增长态势,2014年我国鸡只感染HHS的病例仅有零星发生,2015年已在全国全面爆发,给养鸡业造成了严重的经济损失。为深入揭示FAdV的致病机理及其病理学特点,进而制定出切实有效的防控IBH和HHS的方案及措施,开展了本项研究。1、为了调查鲁豫京等10省市FAdVI的流行情况,对2015～2017年在山东、河南和北京等10省市收集的455份疑似FAdVI阳性样品进行了检测。检测结果表明:2015～2016年感染率逐步上升,2017年感染率有所下降;发病率比较高的省市是山东、江苏、河南和北京;商品蛋鸡感染率比较高,其次是黄羽肉鸡和白羽肉鸡;检测结果还表明鸡Ⅰ群禽腺病毒病的发生具有明显的季节性,在每年6～8月份是该病的高发期,10～11月份是另一个感染高发期。测序结果表明:流行的主要血清型为FAdV-8b 和 FAdV-4。2、为了进一步研究胶东地区流行毒株的病毒生物学特点及血清学特性,2013年从本地区某肉鸡养殖场疑似包涵体肝炎的肝组织病料中分离鉴定出FXWH-8b毒株,2015年从本地区某肉种鸡养殖场疑似心包积水-肝炎综合征的肝组织病料中分离鉴定出FXWH-4毒株。然后对两个分离株采用理化特性检验试验和琼脂糖凝胶扩散试验(AGP)进行了检测,理化特性检测结果表明:分离毒株分别经BUDR、氢氧化钠(pH=10)和60℃ 1h处理后,接种鸡胚,孵育24h,鸡胚表现正常,经PCR检测阴性;而经乙醚、氯仿和盐酸(pH=3)处理后的分离毒株,接种鸡胚,孵育24h,不影响病毒在鸡胚中的增殖,鸡胚出现明显的病变,经PCR检测阳性。AGP试验结果表明:FXWH-8b株与FAdV-8b标准株AV215(FAV-8)的阳性血清呈阳性反应;FXWH-4株与FAdV-4标准株AV211(FAV-4)的阳性血清呈阳性反应。FXWH-8b株与FXWH-4株没有血清学交叉反应。3、为了深入揭示FAdV的致病机理及其病理学特点,采用上述本研究中分离的2个毒株,通过腿部肌肉注射方式接种15d的SPF鸡,结果表明:FXWH-8b株和FXWH-4株均能在24h内引起试验鸡发病,表现明显的临床症状和剖检变化;H.E染色可见两个分离株均可引起脑、胸腺、气管、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、胰脏、十二指肠、空肠、盲肠和法氏囊等器官出现明显的病理变化,均未发现核内包涵体。PCR结果表明FXWH-8b株攻毒后72h,FXWH-4株攻毒后48h,在病鸡肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、空肠和盲肠组织中均检测出了该病毒的核酸,而且两个毒株在攻毒后均可较快地在多个组织器官中定植。免疫组化结果显示:FXWH-8b株在肝脏组织存在强阳性信号,FXWH-4株在肝脏、肾脏、十二指肠和空肠组织存在阳性信号。4、为了解决目前我国没有预防FAdV感染的商品化疫苗的问题,本研究首先对2个分离的毒株各自制成的细胞培养灭活疫苗进行了同源性抗体检测和交叉攻毒保护试验,结果表明:两个分离病毒株的疫苗均能较好地产生抗体,并对自身毒的攻毒感染均有较好的保护效果,但没有交叉保护作用。而后,用FAdV-4毒株对3个公司FAdVI的细胞培养二价灭活疫苗进行了攻毒保护试验,结果显示:3家公司的疫苗均能对FAdV-4病毒的感染有较好的保护作用。然后又对4种疫苗(FAdV-8b发病鸡肝组织灭活疫苗、FAdV-8b鸡胚组织灭活疫苗、FAdV-8b和FAdV-4发病鸡肝组织二价灭活疫苗和FAdV-8b和FAdV-4细胞培养二价灭活疫苗)进行了 5组32批次小型田间试验,结果表明:FAdV-8b发病鸡肝组织灭活疫苗对FAdV-8b毒株的感染有较好的保护作用,但对FAdV-4毒株的感染没有保护作用;FAdV-8b鸡胚组织疫苗对FAdV-8b和FAdV-4两个毒株的感染均无保护作用;FAdV-8b和FAdV-4发病鸡肝组织二价灭活疫苗和FAdV-8b和FAdV-4细胞培养的二价灭活疫苗均对目前胶东地区的流行毒株的感染有较好的保护作用。根据鸡Ⅰ群禽腺病毒的发病日龄结合疫苗的保护效果制定了用FAdV-8b和FAdV-4发病鸡肝组织二价灭活疫苗或FAdV-8b和FAdV-4细胞培养二价灭活疫苗,按照3次(6W颈部皮下、18W和22W胸肌)注射,每次0.5mL/羽的免疫程序,以防控此病。通过比较黄芪多糖+VC+氟苯尼考与单独使用干扰素对该病的治疗效果,发现黄芪多糖+VC+氟苯尼考组合能缓解Ⅰ群禽腺病毒病的感染症状,而单独使用干扰素没有治疗效果。最后在通过优化生物安全体系建设的基础上,将动物福利体系应用于种肉鸡生产管理之中,能够有效降低鸡Ⅰ群禽腺病毒病的发生。上述研究结果表明,2015～2017年在鲁豫京等10个省市发生的鸡Ⅰ群禽腺病毒病的主要流行血清型是FAdV-8b和FAdV-4;从胶东地区养鸡场分离的FXWH-8b毒株和FXWH-4毒株,也属于这两种血清型;2个分离毒株对SPF鸡均有较强的致病力,可侵害鸡的多个组织器官;本研究构建的细胞培养二价灭活疫苗和发病鸡肝组织二价灭活疫苗对胶东地区鸡群流行的Ⅰ群禽腺病毒病具有良好的保护效果;黄芪多糖配伍维生素C和氟苯尼考对Ⅰ群禽腺病毒病有一定的治疗效果;关于鸡Ⅰ群禽腺病毒病的防控问题,作者建议并经实践证明在养鸡生产管理中切实落实生物安全防控措施,并适当贯彻应用动物福利的理论可以有效地防控此病的发生。
【图文】：

模型图,模型图,六邻体,多肽

认为是最大和最复杂的无囊膜ＤＮＡ病毒。每个病毒粒子都是由衣壳、核酸芯髓（Ｃｏｒｅ），逡逑暴露在衣壳外的纤突及其相关蛋白组成。其中衣壳是由六邻体、五邻体、纤突三种蛋逡逑白以及少量蛋白通过非共价键结合形成的正二十面体结构，如图１－１所示，ＦＡｄＶ的逡逑病毒衣壳共有２５２个壳粒，其中有２４０个壳粒分布于每个面上，构成了邋６个六邻体逡逑（Ｈｅｘｏｎ），剩下的１２个壳粒分布于顶角构成五邻体（Ｐｅｎｔｏｎ）。五邻体可以伸出１－１逡逑（ＩＩ群、ＩＩＩ群腺病毒）或２邋（Ｉ群腺病毒）根长度在９？７７．５ｎｍ的纤突（Ｆｉｂｅｒ）邋［５２＿５４］。逡逑纤突将五邻体作为基底，从衣壳的表面开始向外延伸，，中间为杆区，顶端为头节区。逡逑头节区与五邻体可以与病毒侵入的细胞的表面受体特异性结合，促进病毒进一步地对逡逑细胞进行感染［５５，５６］。六邻体由２４０个二十面体构成。ＦＡｄＶ病毒包含了邋１４条多肽，逡逑多肽２是六邻体，多肽３是五邻体周边蛋白，多肽４是纤维蛋白６２Ｋ，多肽５是核心逡逑蛋白，多肽６是六邻体相关蛋白，多肽７是核心蛋白，多肽８是五邻体相关蛋白，多逡逑肽９是９个六邻体所构成的特异性蛋白。在感染细胞核内的病毒粒子常常是晶格状排逡逑列。该病毒ＤＮＡ的末端蛋白为ＴＰ

肾脏,肝脏,胰腺萎缩,局灶性坏死

只胰腺萎缩；肺淤血水肿坏死；肾脏出血、肿大，较多呈现花斑肾；有的鸡只腺胃乳逡逑头出血；肌胃角质膜下出血；脾脏出血水肿；肠道出血，肠黏膜脱落。蛋鸡肝脏破裂，逡逑腹腔内有血水。见图２－１。逡逑瞻逡逑图２－１包涵体肝炎引起的肝脏、肾脏肿大和出血逡逑Ｆｉｇ２－１邋Ｓｗｅｌｌｉｎｇ邋ａｎｄ邋ｈｙｄｒｏｐｅｒｉｃａｒｄｉｕｍ邋ｏｆ邋ｌｉｖｅｒ邋ａｎｄ邋ｋｉｄｎｅｙ邋ｃａｕｓｅｄ邋ｂｙ邋Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ邋ｂｏｄｙ邋ｈｅｐａｔｉｔｉｓ逡逑２．２．２．２心包积水－肝炎综合征逡逑胸肌和腿肌出血；皮下及腹腔脂肪黄染；肝脏都呈现不同程度的褪色至淡褐色和逡逑黄色，肿大质脆，出现充血肿胀，伴有局灶性坏死点和出血点；心脏出现不同程度的逡逑局灶性坏死，心包腔中有淡黄色水样或胶冻样的积液，且心脏松弛柔软；肺淤血水肿逡逑坏死？，胰腺呈点状坏死，部分鸡只胰腺萎缩边缘出血？，肾脏肿大、出血；法氏囊皱褶逡逑处有出血点并见有黏液渗出；脾脏出血肿大；肠道出血、肠黏膜脱落。见图２－２。逡逑２３逡逑
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.31

【参考文献】